Tandutinib (MLN518) 387867-13-2

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 562.7 Tandutinib (MLN518, CT53518) es un potente antagonista de FLT3 con IC50 de 0.22 μM, también inhibe PDGFR y c-Kit, potencia de 15 a 20 veces mayor para FLT3 frente a CSF-1R y selectividad> 100 veces mayor para el mismo objetivo frente a FGFR, EGFR y KDR. Fase 2. \ n Actividad biológica Tandutinib tiene poca actividad contra EGFR, FGFR, KDR, InsR, Src, Abl, PKC, PKA y MAPK. Tandutinib inhibe el crecimiento celular independiente de IL-3 y la autofosforilación de FLT3-ITD con una CI50 de 10-100 nM. Tandutinib también inhibe la proliferación de células de leucemia humana Ba / F3 que contienen mutaciones de FLT3-ITD con valores de IC50 de 10-30 nM, y las células Molm-13 y Molm-14 positivas para FLT3-ITD con una IC50 de 10 nM. En las células Molm-14 positivas para FLT3-ITD, pero no en las células THP-1 negativas para FLT3-ITD, el tratamiento con tandutinib produce una apoptosis significativa en un 51% y un 78% a las 24 y 96 horas, respectivamente, debido a la inhibición específica de FLT3. Tandutinib inhibe preferentemente el crecimiento de colonias blásticas de pacientes FLT3 ITD positivos en comparación con pacientes ITD negativos con AML, sin afectar la formación de colonias por células progenitoras humanas normales. La administración oral de tandutinib a 60 mg / kg dos veces al día aumenta significativamente la supervivencia en ratones que portan células Ba / F3 que expresan el mutante W51 FLT3-ITD y proporciona una reducción significativa de la mortalidad en un modelo de trasplante de médula ósea de ratón. El tratamiento con tandutinib a 180 mg / kg dos veces al día tiene una toxicidad leve hacia la hematopoyesis normal, sin embargo, es una dosis a la que Tandutinib es eficaz para tratar la leucemia FLT3 ITD positiva en ratones. \ n Ensayos de autofosforilación de receptores basados ​​en células La autofosforilación de los ensayos de quinasas de la familia PDGFR son ensayos de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) basados ​​en células que utilizan células CHO que expresan PDGFRβ de tipo salvaje, proteína quimérica PDGFRβ / c-Kit y PDGFRβ / Flt3 que contienen el extracelular y dominios transmembrana de PDGFRβ y el dominio citoplásmico de c-Kit y Flt-3. Las células se cultivan hasta la confluencia en placas de microvaloración de 96 pocillos en condiciones estándar de cultivo de tejidos, seguido de inanición de suero durante 16 horas. Brevemente, las células en reposo se incuban a 37 ° C con concentraciones crecientes de Tandutinib durante 30 minutos, seguido de la adición de PDGF-BB 8 nM durante 10 minutos. Las células se lisan en Tris 100 mM, pH 7,5, NaCl 750 mM, Triton X-100 al 0,5%, pirofosfato de sodio 10 mM, NaF 50 mM, aprotinina 10 μg / ml, leupeptina 10 μg / ml, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1 mM, 1 mM vanadato de sodio, y el lisado se aclara mediante centrifugación a 15.000 g durante 5 minutos. Los lisados ​​clarificados se transfieren a una segunda placa de microvaloración en la que los pocillos se recubren previamente con 500 ng / pocillo de mAb anti-PDGFRβ 1B5B11 y luego se incuban durante 2 horas a temperatura ambiente. Después de lavar tres veces con tampón de unión (gelatina al 0,3%, HEPES 25 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, Tween 20 al 0,01%), se añaden 250 ng / ml de anticuerpo policlonal de conejo anti-fosfotirosina y las placas se incuban a 37 ° C. durante 60 minutos. Posteriormente, cada pocillo se lava tres veces con tampón de unión y se incuba con 1 μg / ml de anticuerpo anti-conejo conjugado con peroxidasa de rábano picante a 37 ° C durante 60 minutos. Los pocillos se lavan antes de añadir 2,2'-azino-bis (ácido 3-etilbenztiazolin-6-sulfónico) y se controla la velocidad de formación del sustrato a 650 nm. Método Las células se exponen a concentraciones crecientes de tandutinib (0,004-30 μM). Las células se cultivan durante 3-7 días en cultivo de tejidos y se cuentan las células viables, determinadas por exclusión del colorante azul tripán. A intervalos diarios, las células se recogen, se lavan y se resuspenden en 100 µl de tampón de unión que contiene HEPES 10 mM (pH 7,4), NaCl 140 mM y CaCl2 2,5 mM. Se añaden anexina V-FITC (100 ng) y yoduro de propidio (250 ng) a la suspensión celular seguido de incubación a temperatura ambiente durante 15 minutos. La citometría de flujo se realiza inmediatamente después de la tinción en un citómetro de flujo FACSort con excitación a 488 nm. La fluorescencia de la tinción de anexina V-FITC y yoduro de propidio de ADN se mide a 515 nm y 585 nm, respectivamente.

Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de FLT3