.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 396.49 Dinaciclib (SCH727965) es un inhibidor de CDK novedoso y potente para CDK2, CDK5, CDK1 y CDK9 con IC50 de 1 nM, 1 nM, 3 nM y 4 nM, respectivamente. También bloquea la incorporación de ADN de timidina (dThd). Fase 3. \ n Actividad biológica Dinaciclib es también un potente inhibidor de la replicación del ADN que bloquea la incorporación del ADN de timidina (dThd) en las células A2780 con una CI50 de 4 nM. Dinaciclib suprime fuertemente la fosforilación de Rb en Ser 807/811 a concentraciones> 6.25 nM, lo que está de acuerdo con la observación de que se requieren concentraciones de 4 nM para una inhibición del 50% de la incorporación de ADN dThd en el mismo modelo celular. Significativamente, la supresión completa de la fosforilación de Rb se correlaciona con el inicio de la apoptosis, como lo indica la aparición del producto de escisión de p85 PARP en células expuestas a Dinaciclib> 6,25 nM. Dinaciclib es activo contra un amplio espectro de líneas de células tumorales humanas. La adición de Dinaciclib durante la exposición a hidroxiurea también suprime la acumulación de γ-H2AX, de forma dosis-dependiente. Dinaciclib inhibe la proliferación de células de melanoma y lleva a las células de melanoma a una apoptosis masiva. Dinaciclib induce la apoptosis de varias líneas celulares de osteosarcoma, incluidas las resistentes a doxorrubicina y dasatinib. Dinaciclib atenúa la fosforilación de RNAP II en la serina 2 y la fosforilación del inhibidor de CDK p27Kip1 en la treonina 187. Se producen reducciones en la actividad de fosforilación a 12 - 40 nM de Dinaciclib (4 a 16 horas después de la adición de Dinaciclib). Dinaciclib también reduce la fosforilación de Rb en la serina 807/811. Dinaciclib induce la apoptosis de células U2OS empobrecidas en p53 y simulacros en un grado similar. La administración ip de dinaciclib a 8, 16, 32 y 48 mg / kg diarios durante 10 días produce una inhibición tumoral del 70%, 70%, 89% y 96%, respectivamente. Dinaciclib MED (dosis mínima efectiva) parece ser un protocolo (solo para referencia) Ensayo de quinasa: [1]
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Cyclin/CDK kinase assay
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Recombinant cyclin/CDK holoenzymes are purified from Sf9 cells engineered to produce baculoviruses that express a specific cyclin or CDK. Cyclin/CDK complexes are typically diluted to a final concentration of 50 μg/mL in a kinase reaction buffer containing 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, and 0.1 mM sodium orthovanadate. For each kinase reaction, 1 μg of enzyme and 20 μL of a 2-μM substrate solution (a biotinylated peptide derived from histone H1) are mixed and combined with 10 μL of diluted Dinaciclib. The reaction is started by the addition of 50 μL of 2 μM ATP and 0.1 μCi of 33P-ATP. Kinase reactions are incubated for 1 hour at room temperature and are stopped by the addition of 0.1% Triton X-100, 1 mM ATP, 5 mM EDTA, and 5 mg/mL streptavidin-coated SPA beads. SPA beads are captured using a 96-well GF/B filter plate and a Filtermate universal harvester. Beads are washed twice with 2 M NaCl and twice with 2 M NaCl containing 1% phosphoric acid. The signal is then assayed using a TopCount 96-well liquid scintillation counter.
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Ensayo celular: [1]
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Cell lines
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A2780 cells
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Concentrations
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0 μM -5 μM
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Incubation Time
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24 hours
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Method
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A2780 cells are maintained in DMEM plus 10% fetal bovine serum and passaged twice weekly by detaching the monolayer with trypsin-EDTA. One hundred microliters of A2780 cells (5 × 103 cells) are added per well to a 96-well Cytostar-T plate and incubated for 16 hours to 24 hours at 37 °C. Dinaciclib is serially diluted in complete media plus 2% 14C-labeled dThd. Media are removed from the Cytostar T plate; 200 μL of various Dinaciclib dilutions are added in quadruplicate; and the cells are incubated for 24 hours at 37 °C. Accumulated incorporation of radiolabel is assayed using scintillation proximity and measured on a TopCounTM.
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\ n Conversión de diferentes modelos de animales según BSA (valor basado en datos del borrador de directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
|
12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Información química
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Molecular Weight (MW)
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396.49
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Formula
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C21H28N6O2
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CAS No.
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779353-01-4
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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26 mg/mL
heating
(65.57 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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8 mg/mL
heating
(20.17 mM)
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In vivo
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15% Captisol
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6 mg/mL
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Chemical Name
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(2S)-1-[3-ethyl-7-[[(1-oxido-3-pyridinyl)methyl]amino]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-5-yl]-2-piperidineethanol
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Stock Solution (1ml DMSO)
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1mM
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10mM
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20mM
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30mM
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Mass(mg)
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0.39649
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3.9649
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7.9298
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11.8947
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Grupos de Producto : Ciclo celular > Inhibidor de CDK
