Peso molecular: 519.28 H 89 2HCl es un potente inhibidor de PKA con Ki de 48 nM, 10 veces más selectivo para PKA que para PKG, más de 500 veces más selectivo que PKC, MLCK, calmodulina quinasa II y caseína quinasa I / II. \ N Actividad biológica H89 2HCl es un potente inhibidor de la proteína quinasa A de PKA (dependiente de cAMP) con Ki de 48 nM, presenta una selectividad 10 veces mayor que la PKG, presenta una selectividad> 500 veces mayor que la PKC, MLCK, calmodulina quinasa II y caseína quinasa I / II. El pretratamiento de las células con H-89 (30 µM) 1 h antes de la adición de forskolina inhibe notablemente la fosforilación de proteínas inducida por forskolina de una manera dependiente de la dosis. H89 también inhibe varias otras quinasas con IC50 de 80, 120, 135, 270, 2600 y 2800 nM para S6K1, MSK1, PKA, ROCKII, PKBα y MAPKAP-K1b, respectivamente. H89 también tiene actividad en algunos receptores celulares y canales iónicos, incluidos los canales Kv1.3 K +, β1AR y β2AR. H89 causa distintas modificaciones de la fosforilación de proteínas, con los cambios más sólidos en la fosforilación son fructosa-1,6-bifosfatasa, ribonucleoproteína nuclear heterogénea (hnRNP), cofactor p47 de NSFL1, todos los cuales tienen conexiones potencialmente reguladoras con AMPc / PKA. Protocolo (solo como referencia) Ensayo de quinasa: [1]
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PKA enzyme activity
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cAMP-dependent protein kinase activity is assayed in a reaction mixture containing, in a final volume of 0.2 mL, 50 mM Tris-HC1 (pH 7.0), 10 mM magnesium acetate, 2 mM EGTA, 1 μM cAMP or absence of cAMP, 3.3-20 μM [γ-32P]ATP (4 × 105 cpm), 0.5 μg of the enzyme, 100 μg of histone H2B, and each compound, as indicated.
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Ensayo celular: [1]
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Cell lines
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PC12D
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Concentrations
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~30 μM
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Incubation Time
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1 h
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Method
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Levels of intracellular cAMP are determined. After 48 h in culture, PC12D cells are cultured in test medium containing 30 μM H-89 for 1 h and then exposed to fresh medium that contained both 10 μM forskolin and 30 μM H-89. Cells are scraped off with a rubber policeman and sonicated in the presence of 0.5 ml of 6% trichloroacetic acid. To extract trichloroacetic acid, 2 ml of petroleum ether is added, the preparation mixed and centrifuged at 3000 rpm for 10 min. After aspiration of the upper layer, the residue sample solution is used for determination.
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Estudio con animales: [5] [6]
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Animal Models
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rat; mice
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Formulation
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Dissolved in 100% DMSO, diluted 1:20 in 0.9% sterile saline (Rat); 1% DMSO (Mice)
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Dosages
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20 or 200 mg/kg (Rat); 0-5 mg/kg (Mice)
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Administration
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s.c. (Rat); i.p. (Mice)
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Solubility
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80,
30 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Conversión de diferentes modelos de animales basados en BSA (valor basado en datos del Borrador de Directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Información química
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Molecular Weight (MW)
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519.28
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Formula
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C20H20BrN3O2S.2HCl
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CAS No.
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130964-39-5
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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104 mg/mL
(200.27 mM)
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Water
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6 mg/mL
(11.55 mM)
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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In vivo
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80
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30 mg/mL
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Chemical Name
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(E)-N-(2-(4-bromocinnamylamino)ethyl)isoquinoline-5-sulfonamide dihydrochloride
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Calculadora de molaridad Calculadora de dilución Calculadora de peso molecular
Grupos de Producto : Otros > Inhibidor de PKA
