AC480 (BMS-599626) 714971-09-2

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 567.01 AC480 (BMS-599626) es un inhibidor selectivo y eficaz de HER1 y HER2 con IC50 de 20 nM y 30 nM, ~ 8 veces menos potente que HER4, > 100 veces a VEGFR2, c-Kit, Lck, MET, etc. Fase 1. \ n Actividad biológica BMS-599626 también inhibe el receptor relacionado HER4, pero con una potencia reducida con IC50 de 190 nM. BMS-599626 se identifica como un inhibidor competitivo con ATP para HER1 y como un inhibidor no competitivo con ATP para HER2 con Ki de 2 nM y 5 nM, respectivamente. BMS-599626 inhibe la proliferación de células tumorales que expresan altos niveles de HER1 y / o HER2, incluidas Sal2, BT474, N87, KPL-4, HCC202, HCC1954, HCC1419, AU565, ZR-75-30, MDA-MB-175, Células GEO y PC9 con IC50 de 0,24 μM, 0,31 μM, 0,45 μM, 0,38 μM, 0,94 μM, 0,34 μM, 0,75 μM, 0,63 μM, 0,51 μM, 0,84 μM, 0,90 μM y 0,34 μM, respectivamente. Aunque la proliferación de la línea celular de tumor ovárico A2780 y fibroblastos MRC5, ninguno de los cuales expresa HER1 o HER2, no es inhibida de manera significativa por BMS-599626. Un estudio reciente muestra que BMS-599626 mejora significativamente la radiosensibilidad de las células HN-5 que expresan tanto EGFR como células Her2, al promover la redistribución del ciclo e inhibir la reparación del ADN. In vivo, la administración oral de BMS-599626 da como resultado una inhibición dependiente de la dosis del crecimiento tumoral Sal2 en dosis que varían de 60 mg / kg a 240 mg / kg, produciendo una potente actividad antitumoral en un xenoinjerto de KPL-4 de tumor de mama humano en su punto dosis máxima tolerada de 180 mg / kg, y también tiene una actividad antitumoral similar en otros modelos de xenoinjerto amplificado con HER2, así como en otros modelos de xenoinjerto que sobreexpresan HER1. \ n Ensayos de proteína quinasa Las secuencias citoplasmáticas completas de HER1, HER2 y HER4 se expresan como proteínas recombinantes en células de insecto Sf9. HER1 y HER4 se expresan como proteínas de fusión con glutatión-S-transferasa y se purifican mediante cromatografía de afinidad en glutatión-S-sefarosa. HER2 se subclona en el vector pBlueBac4 y se expresa como una proteína no etiquetada usando un codón interno de metionina (M687) para el inicio de la traducción. La proteína HER2 truncada se aísla mediante cromatografía en una columna de DEAE-Sepharose equilibrada en un tampón que contiene NaCl 0,1 M, y la proteína recombinante se eluye con un tampón que contiene NaCl 0,3 M. Para los ensayos de quinasa HER, los volúmenes de reacción son 50 μL y contienen 10 ng de proteína de fusión glutatión-S-transferasa o 150 ng de HER2 parcialmente purificado. Las mezclas también contienen 1,5 μM poli (Glu / Tyr) (4: 1), 1 μM ATP, 0,15 μCi [γ-33P] ATP, 50 mM Tris-HCl (pH 7,7), 2 mM DTT, 0,1 mg / mL bovino albúmina de suero y MnCl2 10 mM. Se deja que las reacciones prosigan a 27 ° C durante 1 hora y se terminan mediante la adición de 10 μL de un tampón de parada (2,5 mg / ml de albúmina de suero bovino y EDTA 0,3 M), seguido de una mezcla de 108 μL de ATP 3,5 mM. y ácido tricloroacético al 5%. Las proteínas insolubles en ácido se recuperan en placas GF / C Unifilter con un recolector Filtermate. La incorporación de fosfato radiactivo en el sustrato de poli (Glu / Tyr) se determina mediante recuento de centelleo líquido. El porcentaje de inhibición de la actividad quinasa se determina mediante análisis de regresión no lineal y los datos se expresan como la concentración inhibidora requerida para lograr una inhibición del 50% en relación con las reacciones de control (IC50). Los datos son los promedios de determinaciones por triplicado. Todas las demás tirosina quinasas también se ensayan usando poli (Glu / Tyr) como sustrato. La cinética de la inhibición de HER1 y HER2 se determina en mezclas de reacción que contienen concentraciones variables de ATP y BMS-599626. \ n Método Todas las líneas celulares se mantienen en RPMI 1640 complementado con suero bovino fetal al 10%, 100 unidades / ml de penicilina y 100 μg / ml de estreptomicina. Las células se cultivan en placas a razón de 1.000 por pocillo en placas de 96 pocillos y se cultivan durante 24 horas antes de añadir BMS-599626. BMS-599626 se diluye en medio de cultivo de manera que las concentraciones finales de DMSO sean ≤ 1%. Después de la adición de BMS-599626, las células se cultivan durante 72 horas más antes de que se determine la viabilidad celular midiendo la conversión de colorante de bromuro de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio con el Kit CellTiter96. Para algunas líneas celulares, existe una falta de correlación entre el metabolismo del colorante de bromuro de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio y el número de células, y se usa un ensayo de captación de timidina para medir la proliferación de estas líneas celulares. Las células se siembran en placas de 96 pocillos y se tratan con compuestos como antes. Al final de la incubación de 72 horas, las células se pulsan con [3H] timidina (0,4 µCi / pocillo) durante 3 horas antes de recolectarlas. Las células se digieren con tripsina al 2,5% durante 10 minutos a 37 ° C y se recogen mediante filtración usando placas Packard Filtermate Harvester y GF / C Unifilter. La incorporación de timidina radiactiva en ácidos nucleicos se determina mediante recuento de centelleo líquido.

Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de HER2