CP-724714 537705-08-1

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 469.53 CP-724,714 es un inhibidor selectivo potente de HER2 / ErbB2 con IC50 de 10 nM, selectividad> 640 veces contra EGFR, InsR, IRG-1R, PDGFR , VEGFR2, Abl, Src, c-Met, etc. Fase 2. \ n Actividad biológica CP-724,714 se marca selectivamente contra EGFR con IC50 de 6,4 µM. CP-724,714 es> 1,000 veces menos potente para IR, IGF-1R, PDGFRβ, VGFR2, abl. Src, c-Met c-jun quinasa NH2-terminal (JNK) -2, JNK-3, ZAP-70, quinasa dependiente de ciclina (CDK) -2 y CDK-5. CP-724,714 reduce de forma potente la autofosforilación inducida por EGF de la quimera que contiene el dominio de quinasa erbB2 con IC50 de 32 nM, pero es marcadamente menos potente contra EGFR en células NIH3T3 transfectadas. CP-724,714 inhibe sensiblemente la proliferación de células amplificadas con erbB2, incluidas BT-474 y SKBR3, con IC50 de 0,25 y 0,95 μM. CP-724,714 induce la acumulación de células en la fase G1 y una marcada reducción en la fase S en las células BT-474 a 1 μM. Es probable que CP-724,714 ejerza su hepatotoxicidad a través de la lesión hepatocelular y los mecanismos colestásicos hepatobiliares. CP-724,714 muestra inhibición de la salida de colil-lisil fluoresceína y taurocolato (TC) hacia los canalículos en hepatocitos humanos criopreservados y cultivados frescos, respectivamente. CP-724,714 inhibe el transporte de TC en vesículas de membrana que expresan la bomba de exportación de sales biliares humanas con IC50 de 16 μM e inhibe el principal transportador de eflujo en los canalículos biliares, MDR1, con IC50 de ~ 28 μM. CP-724,714 (25 mg / kg) se absorbe rápidamente después de la administración po y provoca una reducción de la fosforilación del receptor erbB2 del tumor después de la dosificación en xenoinjertos FRE-erbB2 o BT-474. CP-724,714 induce la apoptosis en ratones portadores de xenoinjerto (sc) FRE-erbB2 y muestra una inhibición del crecimiento tumoral del 50% a 50 mg / kg, sin pérdida de peso ni mortalidad. CP-724,714 también tiene una gran actividad antitumoral en xenoinjertos de MDA-MB-453, MDA-MB-231, LoVo (colon) y Colo-205 (colon). Además, CP-724,714 (30 o 100 mg / kg) reduce la quinasa regulada por señales extracelulares y la fosforilación de Akt en xenoinjertos BT-474. \ n Ensayos de quinasa Los dominios intracelulares erbB2 recombinantes (residuos de aminoácidos 675-1255) y EGFR (residuos de aminoácidos 668-1211) se expresan en células Sf9 infectadas con baculovirus como proteínas de fusión de glutatión S-transferasa. Las proteínas se purifican mediante cromatografía de afinidad en perlas de glutatión sefarosa para su uso en el ensayo. Las placas Nunc MaxiSorp de 96 pocillos se recubren mediante incubación durante la noche a 37 ° C con 100 μL / pocillo de 0,25 mg / ml de poli (Glu: Tyr, 4: 1), PGT en PBS. El exceso de PGT se elimina por aspiración y la placa se lava 3 veces con tampón de lavado (Tween 20 al 0,1% en PBS). La reacción de la quinasa se realiza en 50 μl de HEPES de 50 mm (pH 7,4) que contiene 125 mm de cloruro de sodio, 10 mm de cloruro de magnesio, 0,1 mm de ortovanadato de sodio, 1 mm de ATP y aproximadamente 15 ng de proteína recombinante. Se agregan inhibidores en DMSO; la concentración final de DMSO es del 2,5%. La fosforilación se inicia mediante la adición de ATP y se lleva a cabo durante 6 min a temperatura ambiente, con agitación constante. La reacción de la quinasa se termina aspirando la mezcla de reacción y lavando cuatro veces con tampón de lavado. La PGT fosforilada se mide después de una incubación de 25 min con 50 μL / pocillo de anticuerpo antifosfotirosina PY54 conjugado con HRP, diluido a 0,2 μg / ml en tampón de bloqueo (BSA al 3%, Tween 20 al 0,05% en PBS). El anticuerpo se elimina por aspiración y la placa se lava cuatro veces con tampón de lavado. La señal colorimétrica se desarrolla mediante la adición de 50 μL / pocillo de sustrato de peroxidasa de micropocillos de tetrametilbencidina y se detiene mediante la adición de 50 μL / pocillo de ácido sulfúrico 0,09 m. El producto de fosfotirosina formado se estima midiendo la absorbancia a 450 nm. La señal para los controles suele ser A0.6-1.2, prácticamente sin antecedentes en los pocillos sin ATP, proteína quinasa o PGT, y es proporcional al tiempo de incubación durante 6 min. \ n Método Las células se siembran por duplicado a 5 ~ 10 × 103 por pocillo en placas de 24 pocillos. El día después de la siembra en placa, se añade CP-724,714 titulando sobre seis o más diluciones de 0,1 nM a 10 µM. También se siembran los pocillos de control sin CP-724,714. Las células se cultivan durante 6 a 7 días, momento en el que se cuentan las células supervivientes. Después de la tripsinización, las células se colocan en una solución isotónica y se cuentan inmediatamente usando un contador de partículas Coulter Z2. La inhibición del crecimiento se calcula [(1 - valor experimental / valor de control) × 100] para cada concentración. Las curvas de dosis-respuesta se repiten al menos dos veces y se promedian. Los valores de CI50 se calculan utilizando el software Calcusyn.

Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de HER2