NVP-BVU972 1185763-69-2

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 340.38 NVP-BVU972 es un inhibidor de Met selectivo y potente con IC50 de 14 nM. \ n Actividad biológica NVP-BVU972 inhibe de manera potente la MET quinasa pero muestra una baja inhibición contra otras quinasas incluida la quinasa RON más estrechamente relacionada con valores de CI50 de más de 1000 nM. NVP-BVU972 también suprime la fosforilación de MET constitutiva en células GTL-16 o la fosforilación de MET estimulada por HGF en células A549 con valores de CI50 de 7,3 nM y 22 nM, respectivamente. NVP-BVU972 previene de forma potente el crecimiento de las líneas celulares amplificadas con el gen MET GTL-16, MKN-45 y EBC-1 con valores de CI50 de 66 nM, 82 nM y 32 nM, respectivamente. En consonancia con su alta frecuencia en la pantalla NVP-BVU972, las mutaciones Y1230 y D1228 dan lugar a cambios drásticos en los valores de IC50 medidos para NVP-BVU972 en la línea celular BaF3. La resistencia activada por V1155L está más limitada a NVP-BVU972. Una reducción dependiente de la dosis en la fosforilación de TPR-MET cuando se aplica NVP-BVU972 a células BaF3 que expresan TPR-MET de tipo salvaje. Ambas mutaciones Y1230H y D1228A anularon el efecto de NVP-BVU972 pero no AMG 458. Sin embargo, F1200I y L1195V interfieren con la potencia de NVP-BVU972 para prevenir la fosforilación de TPR-MET. \ n Ensayo bioquímico TR-FRET con MET de tipo salvaje y mutantes La actividad enzimática se mide en un ensayo de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia resuelto en el tiempo (TR-FRET), que detecta la fosforilación de tirosina con un anticuerpo anti-fosfotirosina marcado con Eu (donante de fluorescencia) y Aloficocianina conjugada con estreptavidina (aceptor de fluorescencia) que se une a una biotina en el péptido sustrato. Para cada variante, las concentraciones de Km para ATP se determinan en ausencia de NVP-BVU972, y la concentración de ATP en la reacción de quinasa se establece en Km (4 μM para MET wt, 1 μM para MET Y1230H y MET F1200I). Se disuelve NVP-BVU972 y se diluye en DMSO y se analiza por cuadriplicado. Las reacciones de quinasa se llevan a cabo en Tris-HCl 50 mM pH 7,5, MgCl2 8 mM, MnCl2 4 mM, Tween 20 al 0,05%, albúmina de suero bovino al 0,05%, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, Na3VO4 0,1 mM, en placas blancas de 1536 pocillos a temperatura ambiente. NVP-BVU972 y la enzima se incuban en un volumen de 2 μL durante 20 min, seguido de la adición de 1 μL de ATP y 1 μL de sustrato peptídico biotinilado (PTK1) a concentraciones finales de Km y 1 μM, respectivamente. Las concentraciones de enzima en las reacciones son 5 nM para MET wt y 4 nM para las variantes F1200I e Y1230H. Después de 90 min, las reacciones se detienen mediante la adición de 1 μl de solución de parada / detección para alcanzar concentraciones finales de EDTA 10 mM, anticuerpo antifosfotirosina PY20 marcado con Eu 3,5 nM y alophycocianina estreptavidina 10 nM. La transferencia de energía de resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo se mide en un lector de placas Envision (excitación 320 nm, emisión 615 nm y 665 nm). \ n Método Se cultivan células BaF3 que contienen TPR-MET o varios mutantes del mismo en medio RPMI 1640 que contiene suero de ternero fetal al 10%. Para el mantenimiento de las células BaF3 parentales, el medio se complementa adicionalmente con 10 ng / ml de interleucina-3 (IL-3). Para los ensayos de proliferación, las células BaF3 se siembran en placas de 96 pocillos por triplicado a 104 células por pocillo y se incuban con varias concentraciones de NVP-BVU972 durante 72 horas, seguido de la cuantificación de las células viables utilizando una lectura de reducción de colorante de sal sódica de resazurina. Los valores de CI50 se determinan con el complemento XLFit Excel utilizando un modelo de respuesta a la dosis de 4 parámetros.

Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de HER2