IOX1 5852-78-8

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 189.17 IOX1 es un inhibidor potente y de amplio espectro de las oxigenasas 2OG, incluidas las demetilasas JmjC. \ n La actividad biológica IOX1 aumenta los niveles de H3K9me3 en las células HeLa a través de la inhibición de KDM4A sin una inhibición significativa efecto sobre la viabilidad celular. IOX1 muestra una menor eficacia en las células HeLa debido a la baja permeabilidad celular, mientras que el derivado del éster n-octilo mejora su permeabilidad celular. Ensayo AlphaScreen Todos los reactivos se diluyen en HEPES 50 mM, BSA al 0,1%, pH 7,5 complementado con Tween20 al 0,01% y se dejan equilibrar a temperatura ambiente antes de añadirlos a las placas. Los ensayos de recambio catalítico se realizan en volúmenes de 10 μl en placas de 384 pocillos de bajo volumen a temperatura ambiente. La reacción consistió en enzima (5 nM), péptido sustrato biotinilado (30 nM), Fe (II) (1 μM), ascorbato (100 μM), 2OG (10 μM) y se corrió a temperatura ambiente. Para PHD2, la reacción consistió en enzima (5 nM), péptido sustrato biotinilado (60 nM), Fe (II) (20 μM), ascorbato (200 μM), 2OG (2 μM) y se corrió a temperatura ambiente. Se usa EDTA para apagar la reacción (5 μL), se añaden perlas AlphaScreen de donante (conjugadas con estreptavidina) y aceptoras (conjugadas con proteína A) preincubadas con anticuerpos del producto peptídico (5 μL). Las placas se sellan con papel de aluminio para protegerlas de la luz, se incuban a temperatura ambiente durante 60 minutos y se leen en un lector de placas PHERAstar FS utilizando un juego de filtros de excitación / emisión 570 AlphaScreen 680. La concentración final de perlas en la reacción de 20 μL es de 20 μg / mL. Los valores de CI50 se calculan en el Prisma 6 después de la normalización frente a los controles DMSO correspondientes. Método Las actividades antiproliferativas de los compuestos se determinan mediante el ensayo MTT. Las células HeLa se siembran en placas de 96 pocillos y se cultivan a 37 ° C durante 24 h para alcanzar el 70%. Posteriormente, el medio se reemplaza por medio DMEM que contiene los compuestos probados en diferentes concentraciones de 1-300 µM en DMSO al 1%. La estaurosporina en una concentración final de 0,03-10 µM se utiliza como control de la citotoxicidad. Después de 24 h de tratamiento, el medio se reemplaza con CellTiter 96 Aqueous One Solution Reagent y se incuba durante 4 horas. Los valores de CC50 se calculan en el software Prism 6 después de la normalización frente a las células tratadas con DMSO al 1% y los controles de DMSO al 1% en los medios (sin células) correspondientes.

Grupos de Producto : Epigenética > Inhibidor de histona desmetilasa