.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} CYT997 (Lexibulin) \ n Número de catálogo S2195 \ n CYT997 (Lexibulin) Estructura química \ n Peso molecular: 434.53 CYT997 (Lexibulin) es un potente inhibidor de polimerización de microtúbulos con IC50 de 10-100 nM en líneas de células cancerosas. Fase 2. \ n El tratamiento con actividad biológica CYT997 (1 μM) durante 24 horas en células A549 induce una rápida reorganización de los microtúbulos, incluida la destrucción de la red de microtúbulos existente y la acumulación de tubulina en placas dentro del citoplasma de algunas células, lo que conduce a una morfología celular significativa alteraciones que incluyen la pérdida de adherencia y el redondeo celular. CYT997 muestra una potente actividad citotóxica contra un rango de 16 células cancerosas con IC50 que varía de 9 nM para HepG2 a 101 nM para KHOS / NP. Especialmente, CYT997 exhibe una potente actividad contra las células HCT15, que se sabe que poseen el mecanismo de resistencia a múltiples fármacos Pgp (MDR +), con una CI50 de 52 nM. Mediante la inhibición de la polimerización de microtúbulos, CYT997 bloquea el ciclo celular en el límite G2-M e induce un aumento de Bcl-2 fosforilado y una mayor expresión de ciclina B1, así como la activación de caspasa-3 y la generación de poli (ADP-ribosa ) polimerasa. El tratamiento con CYT997 provoca un aumento rápido y reversible de la permeabilidad de las monocapas de HUVEC con una CI50 de ~ 80 nM a 1 hora de exposición. De acuerdo con la alteración de la tubulina celular, CYT997 inhibe de forma potente la proliferación, induce la detención del ciclo celular y, lo que es más importante, la apoptosis de las líneas celulares de mieloma humano (HMCL) y de las células MM primarias. La semivida de CYT997 para la administración oral (2,5 horas) a ratas es ligeramente más larga que la de la administración intravenosa (1,5 horas), con una biodisponibilidad oral absoluta del 50% al 70%. La administración oral de CYT997 induce una inhibición dependiente de la dosis del crecimiento tumoral de xenoinjertos de PC3 en ratones, de forma más potente en comparación con paclitaxel. CYT997 también es eficaz en un modelo singénico ortotópico que utiliza células 4T1 de cáncer de mama de ratón, algunas de las cuales son refractarias al tratamiento con paclitaxel. Una dosis única de CYT997 (7,5 mg / kg, ip) reduce significativamente el flujo sanguíneo del tumor a las 6 horas en las metástasis hepáticas, en un grado similar al del control positivo CA4P dosificado a 100 mg / kg. El tratamiento con CYT997 (15 mg / kg / día) prolonga significativamente la supervivencia en un modelo murino de mielomatosis sistémica agresiva. Protocolo (solo como referencia) Ensayo de quinasa: [1]
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Turbidimetric assay for tubulin polymerization
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The effect of CYT997 on microtubule polymerization is determined using conventional turbidimetric assay using bovine neuronal tubulin in which the assembly of microtubules is monitored by an increase in absorbance at 340 nm. Increasing concentrations of CYT997 is added to 100 μL of tubulin/GTP/glycerol. Turbidimetric assays of microtubule assembly is done by incubating bovine microtubule protein in cuvettes at 37 °C in a thermostatically controlled spectrophotometer measuring the change in absorbance at 340 nm over time in PEM buffer [80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA, and 5% glycerol].
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Ensayo celular: [1]
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Cell lines
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DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, and K562
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Concentrations
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Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM
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Incubation Time
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~72 hours
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Method
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Cells are exposed to various concentrations of CYT997 for ~72 hours. Cell proliferation is assessed with either the Alamar blue or MTT assays. For MTT assays, 5 mg/mL of MTT is added to all wells, plates are incubated for 6 hours at 37 °C, and then lysis buffer is added (10% SDS in 0.01 N HCl) and absorbance is measured at 620 nm in a BMG Technologies Lumistar or Polarstar plate reader. For Alamar blue assays, Alamar blue (10 μL/well) is added to each well and the plates are incubated at 37 °C for 4 hours. The fluorescence is then measured using a fluorescence plate reader with an excitation filter at 544 nm and an emission filter at 590 nm. For cell cycle analysis, cells are fixed and permeabilized with 70% ethanol in PBS and incubated at 4 °C overnight. RNase-treated samples (10 μg RNase/mL for 20 minutes at 37 °C) are stained with propidium iodide (5 μg/mL) at 4 °C for a minimum of 10 minutes. Cell cycle variables are determined by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis using a Beckman-Coulter Quanta SC MPL system and analyzed using CXP Software. For apoptosis analysis, cells are detached and collected. Annexin staining is done using the Vybrant Apoptosis Assay Kit. Cells are stored on ice and analyzed on a Beckman Coulter Quanta MPL within 1 hour of preparation. Annexin V–positive cells are determined using two-channel analysis.
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Estudio con animales: [1]
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Animal Models
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Male nude mice inoculated s.c. with PC3 cells, and female BALB/c mice inoculated with 4T1 cells
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Formulation
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Formulated in NMP/PEG300/saline
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Dosages
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~30 mg/kg/day
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Administration
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Oral gavage thrice a day
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Conversión de diferentes modelos de animales basados en BSA (valor basado en datos del Borrador de Directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Información química
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Molecular Weight (MW)
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434.53
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Formula
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C24H30N6O2
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CAS No.
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917111-44-5
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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86 mg/mL
(197.91 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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20 mg/mL
(46.02 mM)
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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1-ethyl-3-(2-methoxy-4-(5-methyl-4-((S)-1-(pyridin-3-yl)butylamino)pyrimidin-2-yl)phenyl)urea
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Calculadora de molaridad Calculadora de dilución Calculadora de peso molecular
Grupos de Producto : Señalización citoesquelética > Inhibidor asociado a microtúbulos
