Hesperadina 422513-13-1

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 516.65 Hesperadin inhibe de forma potente Aurora B con IC50 de 250 nM. Reduce notablemente la actividad de AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 y PHK, mientras que no inhibe la actividad de MKK1 in vivo. \ N Actividad biológica La Hesperadina inhibe la capacidad de la Aurora B inmunoprecipitada para fosforilar la histona H3 con una CI50 de 250 nM y reduce notablemente la actividad de otras quinasas (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 y PHK) a una concentración de 1 µM. Por el contrario, sólo 20-100 nM de Hesperadina es suficiente para inducir la pérdida de la fosforilación de la histona mitótica H3-Ser10 en las células HeLa. El tratamiento con Hesperadina causa defectos en la mitosis y citocinesis, lo que lleva a la detención de la proliferación de células HeLa y la poliploidización, que puede atribuirse específicamente a la inhibición de la función de Aurora B durante el proceso de unión cromosómica. La heperadina (100 nM) anula rápidamente la detención mitótica inducida por taxol o monastrol, pero no por nocodazol. El tratamiento con Hesperadina y nocodazol en las células HeLa anula la localización del cinetocoro de BubR1 y disminuye la intensidad de Bub1 en los cinetocoros, lo que sugiere que la función de Aurora B es necesaria para el reclutamiento eficaz del cinetocoro de BubR1 y Bub1, que a su vez podría ser necesario para la señalización prolongada del punto de control. Hesperadin previene la fosforilación de la histona H3 del tripanosoma recombinante por la quinasa Aurora-1 de T. brucei (TbAUK1) de Trypanosoma brucei patógeno con una CI50 de 40 nM en ensayos de quinasa in vitro. La heperadina inhibe significativamente el crecimiento celular de formas del torrente sanguíneo infeccioso (BF) cultivadas con IC50 de 48 nM, y solo inhibe débilmente el crecimiento celular de formas procíclicas (PF) en etapa de insecto con IC50 de 550 nM. \ n El ensayo de la quinasa Aurora B Para el ensayo de la quinasa Aurora B, las células HeLa se lisan en un tampón que contiene NaCl 50 mM. El extracto de células completas se centrifuga a 13.000 rpm durante 20 minutos a 4 ° C usando una centrífuga de mesa. El sedimento obtenido a partir de 200 mg de extracto celular completo se extrae de nuevo en 15 ml de tampón de lisis que contiene NaCl 250 mM para obtener la quinasa Aurora B activa a partir de la cromatina mitótica. El sobrenadante de baja velocidad del último extracto se usa para inmunoprecipitación. El anti-AIM-1 de ratón monoclonal, o anti-HA de ratón, se acopla a GammaBind Plus Sepharose, y las perlas se rotan en el extremo del extracto durante 90 minutos a 4 ° C. Las perlas se lavan, se toman alícuotas y se lavan en tampón quinasa (Tris 20 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, MgCl2 10 mM, DTT 1 mM, NaF 10 mM). El ensayo de quinasa se realiza con 10 μL de perlas en 20 μL de tampón de quinasa que contiene 5 μg de histona H3, 10 μM de ATP, 2,5 μCi de [γ-32P] ATP y diferentes concentraciones de Hesperadina durante 20 minutos a 37 ° C. Se añade tampón de muestra SDS y las muestras se hierven y se resuelven mediante SDS-PAGE. El gel se seca y la señal radiactiva se detecta mediante análisis PhosphorImager. Los datos se analizan utilizando el software ImageQuant. Método Las células se exponen a diferentes concentraciones de Hesperadina durante 24 y 48 horas. En los puntos de tiempo indicados, las muestras de células fijadas con metanol se lavan con PBS y posteriormente se tiñen en tampón PI (50 μg / ml de yoduro de propidio, Tris 10 mM, pH 7,5, MgCl2 5 mM, 200 μg / ml de RNasa A) durante 20-40 minutos a 37 ° C. El contenido de ADN se determina mediante citometría de flujo.

Grupos de Producto : Epigenética > Inhibidor de la quinasa Aurora