OSI-930 728033-96-3

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 443.44 OSI-930 es un potente inhibidor de Kit, KDR y CSF-1R con IC50 de 80 nM, 9 nM y 15 nM, respectivamente; también potente contra Flt-1, c-Raf y Lck y baja actividad contra PDGFRα / β, Flt-3 y Abl. Fase 1. \ n Actividad biológica OSI-930 inhibe la proliferación celular en la línea celular HMC-1 con IC50 de 14 nM sin un efecto significativo sobre el crecimiento de la línea celular COLO-205 que no expresa un receptor tirosina quinasa mutante constitutivamente activo. Además, OSI-930 también induce apoptosis en la línea celular HMC-1 con CE50 de 34 nM. Un estudio reciente muestra que OSI-930 inactiva el citocromo P450 (P450) 3A4 recombinante purificado con una Ki de 24 μM en un modo dependiente del tiempo y la concentración. OSI-930, administrado a la dosis máxima eficaz de 200 mg / kg por sonda oral, exhibe una potente actividad antitumoral en una amplia gama de modelos de xenoinjerto preclínicos, incluidos los modelos de xenoinjerto HMC-1, NCI-SNU-5, COLO-205 y U251. Ensayos de proteína quinasa Los ensayos de proteína quinasa se realizan internamente mediante métodos de ensayo basados ​​en ELISA (Kit, KDR, PDGFRα y PDGFRβ) o mediante un método radiométrico. Los ensayos ELISA internos utilizaron poli (Glu: Tyr) como sustrato unido a la superficie de placas de ensayo de 96 pocillos; A continuación, se detecta la fosforilación usando un anticuerpo antifosfotirosina conjugado con HRP. A continuación, el anticuerpo unido se cuantifica utilizando ABTS como sustrato de peroxidasa midiendo la absorbancia a 405/490 nm. Todos los ensayos utilizan dominios catalíticos de quinasa recombinante purificados que se expresan en células de insectos o en bacterias. El kit y la proteína EGFR que se utilizan para los ensayos internos se preparan internamente; se obtienen otras enzimas. La proteína kit recombinante se expresa como una proteína de fusión glutatión S-transferasa NH2-terminal en células de insecto y se purifica inicialmente como una enzima no fosforilada (no activada) con una Km relativamente alta para ATP (400 μM). En algunos ensayos, se prepara una forma activada (tirosina fosforilada) de la enzima mediante incubación con ATP 1 mM durante 1 hora a 30 ° C. La proteína fosforilada se pasa luego a través de una columna de desalación para eliminar la mayor parte del ATP y se almacena a -80 ° C en tampón que contiene 50% de glicerol. La preparación resultante tiene una actividad específica considerablemente más alta y una Km más baja para ATP (25 µM) que la preparación inicial no fosforilada. La inhibición de la autofosforilación del kit por OSI-930 se ensaya mediante la incubación de la enzima no fosforilada a 30 ° C en presencia de ATP 200 μM y diversas concentraciones de OSI-930. La reacción se detiene mediante la eliminación de alícuotas en tampón de muestra SDS-PAGE seguido de calentamiento a 100 ° C durante 5 minutos. A continuación, se determina el grado de fosforilación del kit mediante inmunotransferencia tanto para el kit total como para el kit fosforilado. \ n Método Para los ensayos de proliferación celular y apoptosis, las células se siembran en placas de 96 pocillos y se incuban durante 2 a 3 días en presencia de OSI-930 a diversas concentraciones. La inhibición del crecimiento celular se determina mediante cuantificación luminiscente del contenido de ATP intracelular usando CellTiterGlo. La inducción de la apoptosis dependiente de caspasa por OSI-930 se cuantifica mediante un ensayo enzimático de caspasa 3/7. La inhibición de la angiogénesis por OSI-930 se controla usando el ensayo de crecimiento de brotes endoteliales del anillo aórtico de rata. Se preparan secciones de aorta a partir de ratas macho sacrificadas con CO2 y se cultivan in vitro en una matriz de colágeno en presencia o ausencia de OSI-930. La matriz de colágeno se prepara a partir de colágeno de cola de rata tipo 1 solubilizado en ácido acético al 0,1% a 3 mg / ml, que se combina con un volumen de tampón de colágeno de 0,125 (NaOH 0,05 N, HEPES 200 mM, NaHCO3 260 mM), volumen 0,125 de medio 199 , 0,0125 volumen de NaOH 1 M y GlutaMax al 1%. Los anillos aórticos se incrustan en 0,4 mL de esta matriz en placas de seis pocillos, a los que se añaden 0,5 mL de medio basal endotelial y la cantidad apropiada de OSI-930; los anillos se incuban luego durante 10 días y el crecimiento de los brotes angiogénicos resultante se cuantifica digitalmente a partir de imágenes midiendo el área que contiene los brotes dentro de una serie de anillos concéntricos alrededor del área de tejido aórtico.

Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de c-Kit