Tivantinib (ARQ 197) 905854-02-6

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 369.42 Tivantinib (ARQ 197) es el primer inhibidor de c-Met no competitivo con ATP con Ki de 0.355 μM, poca actividad para Ron y sin inhibición para EGFR, InsR, PDGFRα o FGFR1 / 4. Fase 3. \ n Actividad biológica Se ha demostrado que ARQ-197 previene las respuestas celulares inducidas por HGF / c-met in vitro. ARQ-197 posee actividad antitumoral; inhibiendo la proliferación de células A549, DBTRG y NCI-H441 con IC50 de 0.38, 0.45, 0.29 μM. El tratamiento con ARQ-197 da como resultado una disminución de la fosforilación de la cascada de señalización de MAPK y la prevención de la invasión y la migración. Además, la expresión ectópica de c-Met en NCI-H661, una línea celular que no tiene expresión endógena de c-Met, hace que adquiera un fenotipo invasivo que también es suprimido por ARQ-197. Aunque la adición de concentraciones crecientes de ARQ-197 no afecta significativamente la Km de ATP, la exposición de c-Met a ARQ-197 0,5 µM disminuyó la Vmax de c-Met en aproximadamente 3 veces. La capacidad de ARQ-197 para disminuir la Vmax sin afectar la Km de ATP confirmó que ARQ-197 inhibe c-Met a través de un mecanismo no competitivo con ATP y, por lo tanto, puede explicar su alto grado de selectividad quinasa. ARQ-197 previene el c-Met recombinante humano con una constante inhibidora calculada Ki de aproximadamente 355 nM. Aunque la concentración más alta de ATP utilizada es de 200 µM, la potencia de ARQ-197 contra c-Met no se reduce mediante el uso de concentraciones de ATP de hasta 1 mM. ARQ-197 bloquea la fosforilación de c-Met y las vías de señalización de c-Met aguas abajo. ARQ-197 suprime la autofosforilación de c-Met constitutiva y mediada por ligando y, por extensión, la actividad de c-Met, lo que a su vez conduce a la inhibición de los efectores de c-Met cadena abajo. La inducción de ARQ-197 de apoptosis dependiente de caspasa aumenta en las células cancerosas humanas que expresan c-Met, incluidas las células HT29, MKN-45 y MDA-MB-231. Los tres modelos de xenoinjerto tratados con ARQ-197 muestran reducciones en el crecimiento tumoral: 66% en el modelo HT29, 45% en el modelo MKN-45 y 79% en el modelo MDA-MB-231. En estos estudios de xenoinjerto, no se observaron cambios significativos en el peso corporal después de la administración oral de ARQ-197 a 200 mg / kg. Farmacodinámicamente, la fosforilación de c-Met en tumores de xenoinjerto de colon humano (HT29) está fuertemente inhibida por ARQ-197, según lo evaluado por una reducción dramática de la autofosforilación de c-Met 24 horas después de una dosis oral única de 200 mg / kg de ARQ- 197. Esta misma dosis en ratones muestra que los xenoinjertos tumorales están expuestos a niveles plasmáticos sostenidos de ARQ-197, de acuerdo con la inhibición farmacodinámica observada de la fosforilación de c-Met y la inhibición de la proliferación de líneas de células cancerosas que albergan c-Met. Se determina que los niveles plasmáticos de ARQ-197 10 horas después de la dosificación son 1,3 µM, más de 3 veces por encima de la constante inhibidora bioquímica de ARQ-197 para c-Met. Por lo tanto, ARQ-197 es capaz de suprimir su diana in vivo en el tejido tumoral humano xenoinjertado. En conclusión, ARQ-197 inhibe el crecimiento de tumores humanos xenoinjertados dependientes de c-Met. \ n Ensayo de quinasa in vitro SDS-PAGE de c-Met Se preincubó la proteína c-Met recombinante (100 ng) con concentraciones crecientes de ARQ-197 durante 30 minutos a temperatura ambiente. Después de la preincubación, se añaden a la mezcla de reacción 100 µM de sustrato poli-Glu-Tyr y diversas concentraciones de ATP que contienen 5 µCi de [γ-32P] ATP. La reacción se incuba durante 5 minutos a temperatura ambiente y luego se detiene mediante la adición de 5 μL de gel de poliacrilamida-SDS, reduciendo el tampón de muestra. A continuación, las muestras se cargan en un gel de acrilamida al 7,5% y se realiza SDS-PAGE. Los sustratos de poli-Glu-Tyr fosforilados se visualizan finalmente mediante autorradiografía. La actividad de c-Met se cuantifica por densitometría. \ n Método Se siembran células HT29, MKN-45 y MDA-MB-231 en placas negras de 96 pocillos a 5 x 103 células por pocillo durante la noche en un medio con FBS al 10%. Al día siguiente, las células se tratan con concentraciones crecientes de ARQ-197 (0,03-10 µM) durante 24, 32 y 48 horas a 37 ° C. Después del tratamiento con ARQ-197, se retira el medio que contiene el fármaco y las células se incuban durante al menos 10 minutos en una solución de marcado (HEPES 10 mM, NaCl 140 mM y CaCl2 6 mM) que contiene 2 μg / ml de Hoescht 33342 (canal azul ), Anexina V-FITC diluida 500 veces (canal verde) y 1 μg / ml de yoduro de propidio (canal rojo). Se llevan a cabo la adquisición y el análisis de imágenes de alto contenido. El programa está configurado para tomar cuatro imágenes por pocillo. El tiempo de exposición se establece en 16,7 ms / 10% de ganancia, 500 ms / 35% de ganancia y 300 ms / 30% de ganancia para los canales de 4,6-diamidino-2-fenilindol, FITC y rodamina, respectivamente. Las imágenes se procesan y se determina el número de células positivas para cada canal y cada condición. Además, las células HT29 se tratan con concentraciones crecientes de ARQ-197 durante 32 horas en ausencia o presencia de 25, 50 y 100 µM de ZvAD-FMK (inhibidor de caspasa general irreversible) y se llevan a cabo los mismos procedimientos. Todos los experimentos se realizan por triplicado. Para determinar si el efecto apoptótico se debe a la inhibición de c-Met, se investiga el efecto de ARQ-197 cuando se eliminan gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y c-Met usando ARNip. Las células HT29, MKN-45 y MDA-MB-231 se transfectan con un ARNip de control no dirigido, un ARNip de control dirigido a gapgh o un ARNip dirigido a met. Después de 3 días, se determinan los niveles de expresión de c-Met, GAPDH y β-actina usando anticuerpos específicos. Para determinar si el efecto depende de la caspasa, las células HT29, MKN-45 y MDA-MB-231 se transfectan con un ARNip dirigido a met durante 2 días y se incuban en ausencia o presencia de concentraciones crecientes de ZvAD-FMK durante 1 día adicional. Un ARNip no dirigido y un ARNip dirigido a gapgh (ARNip GAPDH) también se transfectan en paralelo, como controles. A continuación, las células se tiñen con Anexina V-FITC y yoduro de propidio y se determina el porcentaje de células apoptóticas.

Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de c-Met