.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 469,94 PF-299804 es un inhibidor pan-ErbB potente e irreversible, principalmente de EGFR con IC50 de 6 nM, eficaz contra NSCLC con mutaciones EGFR o ERBB2 (resistente a gefitinib ) así como aquellos que albergan la mutación EGFR T790M. Fase 2. \ n Actividad biológica PF299804 es un inhibidor específico de la familia de quinasas ERBB. PF299804 inhibe la señalización de EGFR e induce apoptosis en la línea celular H3255 GR que contiene EGFR T790M. PF299804 es eficaz en líneas celulares de NSCLC sensibles a gefitinib y resistentes a gefitinib. PF299804 inhibe el crecimiento de células H3255 y HCC827 diseñadas para expresar EGFR T790M. PF299804 inhibe la fosforilación de EGFR en presencia de la mutación T790M. Se cree que PF-299804 inhibe irreversiblemente la actividad tirosina quinasa ERBB mediante la unión en el sitio ATP y la modificación covalente de residuos de cisteína nucleófilos en los dominios catalíticos de miembros de la familia ERBB. El PF299804 muestra efectos inhibidores del crecimiento significativos en las células cancerosas gástricas amplificadas con HER2 (SNU216, N87), y tiene valores de concentración inhibitoria del 50% más bajos en comparación con otros inhibidores de la tirosina quinasa EGFR, incluidos gefitinib, lapatinib, BIBW-2992 y CI-1033 . El PF299804 induce la apoptosis y la detención de G1 e inhibe la fosforilación de los receptores de la familia HER y las vías de señalización posteriores, incluidas STAT3, AKT y quinasas reguladas por señales extracelulares (ERK) en células cancerosas gástricas amplificadas con HER2. PF299804 también bloquea la formación de heterodímeros EGFR / HER2, HER2 / HER3 y HER3 / HER4, así como la asociación de HER3 con p85α en células SNU216. Una investigación reciente utiliza cuarenta y siete líneas de cáncer de mama humano y líneas epiteliales de mama inmortalizadas para evaluar los efectos de inhibición de PF299804, los resultados indican que PF299804 inhibe preferentemente el crecimiento de líneas celulares de cáncer de mama amplificadas con HER-2 que las líneas no amplificadas (RR = 3.39, p Por vía oral PF299804 administrado inhibe eficazmente el crecimiento de xenoinjertos HCC827 Del / T790M. La administración oral baja de PF-299804 (15 mg / kg) provoca una actividad antitumoral significativa, que incluye regresiones tumorales marcadas en una variedad de modelos de xenoinjertos tumorales humanos que expresan y / o sobreexpresan miembros de la familia ERBB o contener la doble mutación (L858R / T790M) en ERBB1 (EGFR) asociada con la resistencia a gefitinib y erlotinib. Protocolo (solo como referencia) Ensayo de quinasa: [1]
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ELISA-Based ERBB Kinase Assay
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The ERBB1, ERBB 2, and ERBB4 cytoplasmic fusion proteins are made by cloning the ERBB1 sequence (Met-668 to Ala-1211), ERBB2 (Ile-675 to Val-1256), and ERBB4 sequence (Gly-259 to Gly-690) into the baculoviral vector pFastBac using PCR. Proteins are expressed in baculovirusinfected Sf9 insect cells as GST fusion proteins. The proteins are purified by affinity chromatography using glutathione sepharose beads. Inhibition of ERBB tyrosine kinase activity is assessed using an ELISA-based receptor tyrosine kinase assay. Kinase reactions (50 mM HEPES, pH 7.4, 125 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 100 μM sodium orthovanadate, 2 mM dithiothreitol, 20 μM ATP, PF299804 or vehicle control, and 1-5 nM GST-erbB per 50 μL of reaction mixture) are run in 96-well plates coated with 0.25 mg/mL poly-Glu-Tyr. The reactions are incubated for 6 minutes at room temperature while being shaken. Kinase reactions are stopped by removal of the reaction mixture, and then the wells are washed with wash buffer (0.1% Tween 20 in PBS). Phosphorylated tyrosine residues are detected by adding 0.2 μg/mL antiphosphotyrosine antibody (Oncogene Ab-4; 50 μL/well) coupled to horseradish peroxidase (HRP) diluted in PBS containing 3% BSA and 0.05% Tween 20 for 25 minutes while being shaken at room temperature. The antibody is removed, and plates are washed in wash buffer. HRP substrate (SureBlue3,3,5,5-tetramethyl benzidine or TMB) is added (50 μL per well) and incubated for 10-20 minutes while it is shaken at room temperature. The TMB reaction is stopped with the addition of 50 μL of stop solution (0.09 N H2SO4). The signal is quantified by measuring absorbance at 450 nm. IC50 values are determined for PF299804 using the median effect method.
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Ensayo celular: [1]
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Cell lines
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Various NSCLC cell lines
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Concentrations
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0-20 nM
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Incubation Time
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72 hours
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Method
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Growth and inhibition of growth is assessed by 5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) assay. This assay, a colorimetric method fordetermining the number of viable cells, is based on the bioreduction of MTS by cells to a formazan product that is soluble in cell culture medium, can be detected spectrophotometrically. The cells are exposed totreatment for 72 hours, and the number of cells used per experiment is determined empirically. All experimental points are set up in 6 to 12 wells, and all experiments are repeated at least thrice. The data are graphically displayed using GraphPad Prism version 3.00 for Windows (GraphPad Software). The curves are fitted using a nonlinear regression model with a sigmoidal dose response.
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Estudio con animales: [1]
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Animal Models
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HCC827-GFP or HCC827-Del/T790M lung cancer cells (in 0.2 mL of PBS) are inoculated s.c. into the lower-right quadrant of the flank of nude mice
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Formulation
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PF299804 is dissolved in DMSO in 10 mM at -20 °
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Dosages
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10 mg/kg
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Administration
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Administered via oral gavage
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Solubility
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80, pH 9,
10 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Conversión de diferentes modelos de animales basados en BSA (valor basado en datos del Borrador de Directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Información química
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Molecular Weight (MW)
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469.94
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Formula
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C24H25ClFN5O2
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CAS No.
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1110813-31-4
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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19 mg/mL
(40.43 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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In vivo
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80, pH 9
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10 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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(E)-N-(4-(3-chloro-4-fluorophenylamino)-7-methoxyquinazolin-6-yl)-4-(piperidin-1-yl)but-2-enamide
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Calculadora de molaridad Calculadora de dilución Calculadora de peso molecular
Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de EGFR
