UNC0631 1320288-19-4

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 635.93 UNC0631 es un potente inhibidor de histona metiltransferasa G9a con IC50 de 4 nM. \ n Actividad biológica En las células MCF7, 22RV1 e IMR90, UNC0631 reduce de forma potente los niveles de H3K9me2 y muestra una excelente separación de la potencia funcional frente a la toxicidad celular. Por lo tanto, UNC0631 se puede utilizar como una herramienta para que la comunidad de investigación biomédica investigue más a fondo la biología de G9a y su papel en la remodelación de la cromatina. Ensayos acoplados a SAHH Este ensayo utiliza SAHH para hidrolizar el producto de transferencia de metilo SAH en homocisteína y adenosina en presencia de adenosina desaminasa que convierte la adenosina en inosina. A continuación, se determina la concentración de homocisteína mediante la conjugación de su resto sulfhidrilo libre con un fluoróforo sensible al tiol, ThioGlo. Para las determinaciones de IC50, las mezclas de ensayo se preparan en tampón de fosfato de potasio 25 mM pH 7,5, EDTA 1 mM, MgCl2 2 mM, Triton X-100 al 0,01% con SAHH 5 μM, 0,3 U / ml de adenosina desaminasa, SAM 25 μM y 15 μM ThioGlo. Se analizan G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 y SUV39H2 a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM y 100 nM, respectivamente. Los inhibidores se añaden a concentraciones que oscilan entre 4 nM y 16 µM. Después de 2 min de incubación, las reacciones se inician mediante la adición de los péptidos de histona: H3 10 μM (1–25) para G9a, H3 20 μM (1–25) para GLP, H3 100 μM (1–25) para SETD7, 500 μM H4 (1–24) para SETD8, 10 μM H4 (1–24) para PRMT3 y 200 μM H3K9Me1 (1–15) para SUV39H2. Después de la reacción de metilación se controla el aumento de la fluorescencia utilizando un lector de placas Biotek Synergy2 con filtro de excitación de 360/40 nm y filtro de emisión de 528/20 nm durante 20 min en formato de placa de 384 pocillos. Los valores de actividad se corrigen restando el fondo causado por el péptido o la proteína. Los valores de CI50 se calculan usando Sigmaplot. Las desviaciones estándar se calculan a partir de dos experimentos independientes. Método Se cultivan células MDA-MB-231, PC3, HCT116 en RPMI con FBS al 10%, células 22RV1 en alphaMEM y células FBS al 10%, MCF7 e IMR90 en DMEM con FBS al 10%. Las células se tratan con inhibidores durante 48 h. El medio se retira y se reemplaza con DMEM 10% FBS sin rojo de fenol suplementado con 1 mg / ml de MTT y se incuba durante 1 a 2 h. Las células vivas reducen el MTT amarillo a formazán púrpura. La formazan resultante se solubiliza en isopropanol acidificado y Triton al 1%. La absorbancia de la señal de formazán se mide a 570 nm y se corrige para el fondo de 650 nm. Las CI50 se calculan usando el paquete estadístico GraphPad Prizm con ajuste de curva de respuesta a dosis de pendiente variable sigmoidal.

Grupos de Producto : Epigenética > Inhibidor de histona metiltransferasa