EI1 1418308-27-6

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 390.48 EI1 es un inhibidor de EZH2 potente y selectivo con IC50 de 15 nM y 13 nM para EZH2 (WT) y EZH2 (Y641F), respectivamente. \ n Actividad biológica En las células DLBCL, EI1 inhibe la metilación celular de H3K27 y activa la expresión p16 del gen diana Ezh2. En fibroblastos embrionarios de ratón, EI1 también inhibe H3K27me3 y la proliferación celular. Además, EI1 inhibe selectivamente el crecimiento de células DLBCL que portan la mutación Ezh2 y provoca la detención del ciclo celular y la apoptosis. Ensayo bioquímico Para la determinación de IC50, EI1 se diluye en serie tres veces en DMSO para un total de 12 concentraciones, con la concentración inicial en 1 μM. La reacción se incuba a temperatura ambiente durante 120 min y se detiene añadiendo una solución de inactivación (TFA al 2,5% con d4-SAH 320 nM). La producción de SAH se cuantifica utilizando una espectrometría de masas de triple cuadrupolo API 4000 con Turbulon Spray junto con Prominence UFLC. El porcentaje de inhibición se normaliza utilizando controles positivos (sin inhibidor) y negativos (sin enzima), y la CI50 se calcula utilizando PRISM. Los estudios enzimáticos de competición de S-adenosil metionina (SAM) se realizan con una ligera modificación de la condición de reacción: se utiliza EI1 10 µM como dosis inicial para la dilución en serie. La SAM se titula en un rango entre 1 µM y 50 µM (correspondiente a 1 × Km y 50 × Km), y el péptido sustrato está presente en la mezcla de reacción final en su condición saturada (10 µM). Para el perfil de histona metiltransferasa (HMT) en la Tabla 1, todos los HMT son proteínas recombinantes purificadas de Escherichia coli o del sistema Baculovirus. En los ensayos bioquímicos se utilizaron el dominio catalítico de G9a, SuV39H2, Set7 / 9, CARM1, SETD8, NSD3, SETD2 y Dot1L, y la proteína SmyD2 de longitud completa. Las reacciones bioquímicas de HMT se caracterizan cuidadosamente con estudios de enzimología y se determinan la SAM y la Km del sustrato. Las concentraciones de SAM y sustrato se mantienen en sus respectivos Km para la mayoría de los HMT, excepto los (SmyD2 y Set7 / 9) con valor SAM-Km bajo, para los cuales se utiliza SAM de 0,5 μM. Todas las reacciones de HMT se realizan utilizando el mismo formato de ensayo en el que la producción de SAH a partir de la reacción bioquímica se cuantifica mediante LC-MS. \ n Método Se siembran células de linfoma de células B grandes difuso en crecimiento exponencial (DLBCL) en placas de 12 pocillos a una densidad de 1 x 105 células / ml con la concentración indicada de EI1. El número de células viables se determina cada 3 a 4 días durante un máximo de 14 o 15 días mediante Vi-CELL. Se siembran fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) en una placa de seis pocillos a 2,5 x 104 células / ml y se tratan con EI1 (3,3 µM) o 4-OH-tamoxifeno (100 nM). El número de células viables se determina en los días 3, 6 y 11. En los días de recuento de células, el medio de crecimiento fresco y el compuesto se reponen y las células se dividen de nuevo a una densidad de 1 x 105 células / ml. El número total de células se expresa como células viables ajustadas divididas por mililitro. La CI50 se calcula mediante PRISM y todos los experimentos de proliferación se repiten más de dos veces y se presentan datos representativos.

Grupos de Producto : Epigenética > Inhibidor de histona metiltransferasa