AT9283 896466-04-9

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 381,43 AT9283 es ​​un potente inhibidor de JAK2 / 3 con IC50 de 1,2 nM / 1,1 nM; también potente para Aurora A / B, Abl (T315I). Fase 2. \ n Actividad biológica AT9283 conduce a un fenotipo poliploide claro al inhibir la actividad de la quinasa Aurora B en las células HCT116 con una CI50 de 30 nM. Además, AT9283 también produce la potente inhibición de la formación de colonias de HCT116. En ratones portadores de xenoinjerto de carcinoma de colon humano HCT116, el tratamiento con AT9283 (15 mg / kg y 20 mg / kg) durante 16 días da como resultado una inhibición significativa del crecimiento tumoral del 67% y 76%, respectivamente. Además, AT9283 también exhibe una vida media significativamente más larga en tumores (2,5 horas) en comparación con el plasma (0,5 horas) y una modesta biodisponibilidad oral en ratones (Fp.o. = 24%). Ensayos de quinasa Aurora A y Aurora B Los ensayos para Aurora A y B se realizan en un formato DELFIA. La enzima Aurora A se incuba con AT9283 y sustrato de marea cruzada 3 μM (biotina-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG) en MOPS 10 mM, pH 7, BSA 0,1 mg / ml, Brij-35 al 0,001%, glicerol 0,5%, EDTA 0,2 mM, MgCl2 10 mM , 0,01% de β-mercaptoetanol, 15 µM de ATP y 2,5% de DMSO. La enzima Aurora B se incuba con AT9283, 3 μM del sustrato anterior en Tris 25 mM, pH 8.5, MgCl2 5 mM, BSA 0.1 mg / mL, Tween-20 al 0.025%, DTT 1 mM, ATP 15 μM y DMSO al 2.5% . Se deja que las reacciones prosigan durante 60 minutos y 45-90 minutos para Aurora A y Aurora B, respectivamente, antes de inactivar con EDTA. Las mezclas de reacción se transfieren luego a una placa recubierta con neutravidina y el péptido fosforilado se cuantifica por medio de un anticuerpo fosfoespecífico y un anticuerpo secundario marcado con europio usando fluorescencia resuelta en el tiempo (excitación, 337 nm; emisión, 620 nm). Los valores de CI50 para los compuestos de control son 92 nM (ensayo Aurora A) y 17 nM (Aurora B). \ n Método \ n Se cultivan células HCT 116 en DMEM + FBS al 10% + GLUTAMAX I. Se siembran placas negras de 96 pocillos de fondo plano (transparente) tratadas con cultivo de tejidos en 200 μL de medio y se incuban durante aproximadamente 16 horas a 37 ° C. C en una atmósfera humidificada de 5% de CO2 en aire. Las células se tratan con el compuesto de prueba a nueve concentraciones diferentes (que abarcan de 1 nM a 10 µM, más el control del vehículo DMSO) y luego se incuban durante 72 horas. Luego se anotan las observaciones morfológicas de poliploidía de las células. Se informa la concentración de AT9283 requerida para producir un fenotipo poliploide distinto. Las células se siembran a una concentración de 75-100 células / ml de medio de cultivo relevante en placas de cultivo de tejidos de 6 o 24 pocillos y se dejan recuperar durante 16 horas. Se añade el compuesto de prueba (11 concentraciones que abarcan de 0,1 nM a 10 µM) o el control del vehículo (DMSO) a pocillos duplicados para dar una concentración final de DMSO del 0,1%. Después de la adición del compuesto, se permite que las colonias crezcan entre 10 y 14 días para un recuento óptimo de colonias discretas. Las colonias se fijan en 2 ml de fijador de Carnoys (ácido acético al 25%, MeOH al 75%) y se tiñen en 2 ml de violeta cristal al 0,4% p / v. Se cuenta el número de colonias en cada pocillo. Los valores de CI50 se calculan mediante curvas de CI50 dosis-respuesta sigmoidea (pendiente variable) usando el software Prism Graphpad.
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Grupos de Producto : Epigenética > Inhibidor de JAK