.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 412.48 BIX02188 es un inhibidor selectivo de MEK5 con IC50 de 4,3 nM, también inhibe la actividad catalítica de ERK5 con IC50 de 810 nM y no inhibe quinasas estrechamente relacionadas MEK1, MEK2 , ERK2 y JNK2. \ N Actividad biológica BIX02188 bloquea significativamente la actividad catalítica de MEK5 con IC50 de 4,3 nM e inhibe la actividad catalítica de ERK5 con IC50 de 0,83 μM. No muestra actividad contra quinasas estrechamente relacionadas MEK1, MEK2, ERK1, p38α, JNK2, TGFβR1, EGFR y STK16 con valores de CI50 de 1.8 μM para TGFβR1, 3.9 μM para p38α y> 6.3 μM para otras quinasas. El pretratamiento con BIX02188 inhibe la fosforilación de ERK5 inducida por sorbitol en células HeLa de una manera dependiente de la dosis y no muestra actividad inhibidora contra la fosforilación de MAPK ERK1 / 2, p38 y JNK1 / 2. El tratamiento con BIX02188 solo durante 24 horas en células HeLa o HEK293 no muestra ningún efecto citotóxico. BIX02188 inhibe la activación transcripcional de MEF2C a través de la cascada de señalización MEK5 / ERK5 en el sistema activo de expresión de luciferasa impulsado por MEK5 / ERK5 / MEF2C en células HeLa y HEK293 con valores de IC50 de 1,15 μM y 0,82 μM, respectivamente. BIX02188 también inhibe la fosforilación de BMK1 en células endoteliales microvasculares de pulmón bovino (BLMEC) que se estimulan con H2O2 300 μM, de manera dosis-dependiente, con IC50 de 0,8 μM, específicamente bloqueando la vía de señal MEK5. BIX02188 invierte completamente el efecto inhibidor sobre la mediación del TNF; La activación de JNK tuvo un efecto similar sobre la inhibición de BMK1, lo que sugiere que inhibe la señalización de TNF a través de la activación de la vía de señalización MEK5-BMK1. Protocolo (solo como referencia) Ensayo de quinasa: [1]
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Catalytic assay
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MEK5 protein isolated from a baculovirus expression system is used to measure kinase activity utilizing PKLight ATP Detection Reagent. The assay is performed using 15 nM GST-MEK5 and 0.75 μM ATP in assay buffer consisting of 25 mM Hepes, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 50 mM KCl, 0.2% BSA, 0.01% CHAPS, 100 μM Na3VO4, 0.5 mM DTT and 1% DMSO in the presence of varying concentrations of BIX02188. The kinase reaction mixture is incubated for 90 minutes at room temperature followed by addition of 10 μL of an ATP detection reagent for 15 minutes. The relative light unit (RLU) signal is measured and the RLU signals are converted to percent of control (POC) values for the determination of IC50 value.
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Ensayo celular: [1]
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Cell lines
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HeLa cells
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Concentrations
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Dissolved in DMSO, final concentration ~10 μM
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Incubation Time
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Pretreatment for 1.5 hours
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Method
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The cells are serum starved for 20 hours prior to stimulation with sorbitol at a final concentration of 0.4 M for 20 minutes at 37 °C. BIX02188 is added 1.5 hours prior to the addition of sorbitol. The cells are harvested and lysed in 50 μL RIPA buffer containing Halt protease and phosphate inhibitors at 4 °C for 5-10 minutes. The lysates are centrifuged for 10 minutes at 14,000 rpm and 50 μL lysate is added to 50 μl 2× sample buffer and boiled for 4 minutes at 95 °C. A 20 µl sample is run on SDS–PAGE 10% Tris-glycine gels and transferred to nitrocellulose. Western blotting is done with appropriate antibodies.
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Conversión de diferentes modelos de animales basados en BSA (valor basado en datos del Borrador de Directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
|
0.05
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0.025
|
0.02
|
0.007
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Km factor
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20
|
20
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12
|
12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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\ n Información química
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Molecular Weight (MW)
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412.48
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Formula
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C25H24N4O2
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CAS No.
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1094614-84-2
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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43 mg/mL
(104.24 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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3 mg/mL
(7.27 mM)
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In vivo
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30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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(Z)-3-((3-((dimethylamino)methyl)phenylamino)(phenyl)methylene)-2-oxoindoline-6-carboxamide
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Calculadora de molaridad Calculadora de dilución Calculadora de peso molecular
Grupos de Producto : MAPK > Inhibidor de MEK
