Peso molecular: 266.29 Tyrphostin AG 1296 es un inhibidor de PDGFR con IC50 de 0.3-0.5 μM, sin actividad para EGFR. \ N La actividad biológica AG 1296 inhibe selectivamente la quinasa del receptor de PDGF y la síntesis de ADN dependiente de PDGF en células Swiss 3T3 y en porcinos células endoteliales de la aorta con concentraciones inhibidoras del 50% por debajo de 5 y 1 μM, respectivamente. AG1296 inhibe FGFR y c-Kit con IC50 de 12,3 μM y 1,8 μM en células Swiss 3T3. AG1296 inhibe de forma potente la señalización de los receptores -α y -β de PDGF humanos, pero no tiene ningún efecto sobre la autofosforilación del VEGFR KDR o sobre la síntesis de ADN inducida por VEGF en células endoteliales aórticas porcinas. \ n El tratamiento con AG1296 revierte el fenotipo transformado de las células NIH 3T3 transfectadas con sis pero no tiene ningún efecto sobre las células NIH3T3 transformadas con src. AG1296 es un inhibidor competitivo con ATP. AG1296 no interfiere con la unión de PDGF ni con la dimerización del receptor de PDGF mientras que anula la autofosforilación del receptor de PDGF. Por tanto, AG1296 es un inhibidor puro de la actividad catalítica del receptor tirosina quinasa. Ensayos de autofosforilación de membranas Las membranas se preparan a partir de cultivos confluentes de células Swiss 3T3 como se describe. Para medir la autofosforilación del receptor, se incuban 10 μg de proteína de membrana por ensayo durante 20 min en hielo en presencia de 1,2 μg / ml de EGF o 2 μg / ml de PDGF, o ambos; Hepes 50 mM (pH 7,5); y MnCl2 3 mM en un volumen de 45 μl. Para probar los efectos de las tirfostinas, estas se agregan en un volumen de 0.5 μl (en DMSO; concentración final, 0.5%) 15 min antes de la adición de los factores de crecimiento. \ n La fosforilación se inicia mediante la adición de [γ-32P] ATP y se termina después de 2 min mediante la adición de 10 μl de una solución que contiene 6% de SDS, 30% de β-mercatoetanol, 40% de glicerol y 0,5 mg / ml de azul de bromofenol. Las muestras se calientan durante 5 min a 95ºC y se someten a SDS-PAGE usando geles de acrilamida al 10%. Los geles se tiñen y secan y se someten a análisis autorradiográfico. Método Las células se siembran en placas de 24 pocillos (5000 células / pocillo) en DMEM / FCS al 10%. Al día siguiente, el medio se cambia a DMEM / FcS al 2% con o sin factores de crecimiento y se añaden tirfostinas como se indica. Tres días después, las células se cuentan en un hemocitómetro. Conversión de diferentes animales modelo basado en BSA (valor basado en datos del Borrador de Directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de PDGFR
