CP-673451

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: 417.5 CP-673451 es un inhibidor selectivo de PDGFRα / β con IC50 de 10 nM / 1 nM, exhibe una selectividad> 450 veces sobre otros receptores angiogénicos, tiene actividad antiangiogénica y antitumoral . \ n Actividad biológica CP 673451 es un inhibidor selectivo de PDGFRα / β con IC50 de 10 nM / 1 nM, presenta una selectividad> 450 veces superior a otros receptores angiogénicos. En los tumores de glioblastoma, CP-673451 (33 mg / kg) proporciona> 50% de inhibición del receptor de PDGFR-β durante 4 horas, lo que corresponde a una CE50 de 120 ng / ml en plasma a Cmax. En un modelo de angiogénesis en esponja, CP-673451 inhibe el 70% de la angiogénesis estimulada por PDGF-BB a una dosis de 3 mg / kg (qd × 5, po, correspondiente a 5,5 ng / ml en Cmax). CP-673451 disminuye la tasa de proliferación celular a través de mecanismos que implican una reducción de la fosforilación de GSK-3α y GSK-3β. En ambos cultivos, RD y RUCH2, CP-673451 altera la capacidad de formación de rabdosferas y la diferenciación celular, lo que provoca un aumento de la senescencia. CP 673451 (una vez al día po ~ 0 días de dosificación de forma rutinaria) inhibe el crecimiento tumoral (ED50 en ratones portadores de xenoinjerto RUCH2, CP 673451 reduce el crecimiento tumoral y la infiltración de células estromales. \ N Ensayo de inhibición de quinasa Un constructo de dominio de quinasa marcado con glutatión S-transferasa de la porción intracelular del PDGFR-β (aminoácidos 693-1401, nº de acceso J03278) se expresa en células Sf-9 (sistema de expresión de baculovirus). La cinética enzimática se determina incubando la enzima con concentraciones crecientes de ATP en tampón de fosforilación [50 mmol / L HEPES (pH 7.3), 125 mmol / L NaCl, 24 mmol / L MgCl2 en placas Nunc Immuno MaxiSorp de 96 pocillos previamente recubiertas con 100 μL de poli-Glu-Tyr 100 μg / mL (relación 4: 1 ) diluido en PBS. \ n Después de 10 minutos, las placas se lavan (PBS, 0.1% Tween 20), se incuban con anticuerpo anti-fosfotirosina-peroxidasa de rábano picante y se diluyen en PBS, 0.05% Tween 20, 3% BSA durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las placas se lavan como anteriormente y se incuban con 3,3 ', 5,5'-tetrametilbenz Yo ceno. La reacción se detiene añadiendo un volumen igual de 0,09 NaH2SO4. La señal dependiente de fosfotirosina se cuantifica luego en un lector de placas a 450 nm. \ n Para los ensayos enzimáticos de rutina, la enzima se incuba con ATP 10 μM (final) en presencia de un compuesto diluido en DMSO (ensayo final de DMSO al 1,6% v / v) durante 30 minutos a temperatura ambiente en placas, como se indicó anteriormente, previamente recubiertas con 100 μL de 6,25 μg / mL de poli-Glu-Tyr. El resto del ensayo se lleva a cabo como antes, y los valores de CI50 se calculan como porcentaje de inhibición del control. Método Se han generado células PAE que expresan de forma estable PDGFR y VEGFR de longitud completa. Para los ensayos de selectividad basados ​​en células, las células PAE se transfectan con PDGFR-a, PDGFR-h o VEGFR-2 humanos de longitud completa. Las células se siembran a 4 × 105 células / ml en 50 μl de medio de crecimiento (medio Ham's F-12 complementado con suero bovino fetal al 10%, 50.000 unidades de penicilina y estreptomicina cada una, y 500 μg / ml de gentamicina) por pocillo en placas de 96 pocillos . Después de 6 a 8 horas, el medio de cultivo se reemplaza con 50 μL de medio empobrecido en suero (como antes, pero con suero bovino fetal al 0,1%) y las células se incuban durante la noche. \ n Inmediatamente antes de la adición del compuesto, el medio se reemplazó con 95 μL de medio empobrecido en suero. Los compuestos se diluyen en DMSO al 100%, se añaden a las células a una concentración final de DMSO de 0,25% v / vy se incuban a 37ºC durante 10 minutos. Las células se estimulan con el ligando apropiado y se incuban como antes durante 8 minutos adicionales. El medio se retira y las células se lavan una vez con PBS, luego se lisan con 50 μL de tampón HNTG [20 mmol / L de HEPES (pH 7.5), 150 mmol / L de NaCl, 2% Triton X-100, 10% de glicerol, 5 μmol / L EDTA, 2 mmol / L NaVO4 y 1 tableta de inhibidor de proteasa completo sin EDTA por 25 ml] durante 5 minutos a temperatura ambiente. \ n A continuación, los lisados ​​se diluyen con 50 μL de tampón HG [20 mmol / L de HEPES (pH 7,5), glicerol al 10%]. Los lisados ​​celulares diluidos se mezclan a fondo, se transfieren 50 µl de sobrenadante a la placa de captura de ELISA y se incuban a temperatura ambiente durante 2 horas con agitación. Las placas de captura de ELISA se preparan recubriendo placas ReactiBind de cabra-antirabbit de 96 pocillos con 100 μl / pocillo de 5 μg / ml de anticuerpo anti-PDGFR-h humano, anti-PDGFR-a o anti-VEGFR-2 de conejo de 5 μg / ml durante 60 a 90 minutos. \ n Al final de las 2 horas de incubación, las placas se lavan (PBS, Tween 20 al 0,1%) antes de la incubación con anticuerpo anti-fosfotirosina-peroxidasa de rábano picante (diluido en PBS, Tween 20 al 0,05%) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las placas se lavan de nuevo, luego se incuban con tetrametilbencidina y se evalúan como se describe anteriormente. Los valores de CI50 se calculan como porcentaje de inhibición del control.

Grupos de Producto : Proteína tirosina quinasa > Inhibidor de PDGFR