.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 518.41 RAF265 (CHIR-265) es un potente inhibidor selectivo de C-Raf / B-Raf / B-Raf V600E con IC50 de 3-60 nM, y exhibe potente inhibición de la fosforilación de VEGFR2 con CE50 de 30 nM. Fase 2. \ n Actividad biológica RAF265 inhibe C-Raf, B-Raf de tipo salvaje y B-Raf mutante (V600E). RAF265 bloquea eficazmente la fosforilación de los sustratos MEK y ERK posteriores de Raf en las células y también mata líneas celulares de melanoma y cáncer colorrectal que albergan mutaciones B-Raf independientes del estado de mutación PTEN. La inhibición de la quinasa Raf por RAF265 en líneas celulares de melanoma B-Raf mutantes provoca la detención del ciclo celular e induce la apoptosis, imitando el efecto de Raf RNAi en estas células. RAF265 también inhibe de forma potente la fosforilación de VEGFR2 y la proliferación de hMVEC estimuladas por VEGF. En las células HT29 y MDAMB231, RAF265 muestra actividad inhibidora con IC20 de 1 a 3 μM e IC50 de 5 a 10 μM, respectivamente. Mientras que RAF265 conduce a una disminución significativa en la supervivencia clonogénica en todas las líneas celulares probadas, lo que significa que RAF265 induce un efecto dominante sobre la supervivencia clonogénica. La adición de RAF265 a RAD001 en células HCT116 podría conducir a una disminución moderada de AKT, proteína S6 y fosforilación de 4EBP1. Raf265 reduce notablemente el nivel de proteína de Bcl-2 y es un gran inhibidor en las células CM y NCI-H727, mientras que no tiene ningún efecto sobre la susceptibilidad TRAIL de las células BON1 y GOT1. Proteína quinasa D3 (PRKD3) que, cuando se derriba, podría mejorar la muerte celular por RAF265 en células de melanoma A2058, que previenen la reactivación de la señalización de MAPK, inducen la escisión de PARP, aumentan la actividad de caspasa, interrumpen la progresión del ciclo celular e inhiben la formación de colonias. RAF265 muestra 71% a 72% de TVI% (porcentaje de inhibición del volumen tumoral) en xenoinjertos de HCT116 a 12 mg / kg. Mientras que la combinación de RAF265 y RAD001 muestra una actividad antitumoral mejorada con un aumento de T10 (tiempo para lograr un volumen tumoral relativo de 10 veces el volumen tumoral inicial) y retraso en el crecimiento tumoral. La combinación de RAD001 y RAF265 también mejora significativamente la activación de caspasa-3 en HCT116 y MDAMB231 pero no en xenoinjertos A549. RAF265 inhibe la acumulación de FDG (2-desoxi-2- [18F] fluoro-d-glucosa) y disminuye los volúmenes tumorales en xenoinjertos A375M mediante dosificación oral de 100 mg / kg. Protocolo (solo como referencia) Ensayo de quinasa: [1]
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Assay Protocol
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Raf and Mek are combined at 2 × final concentrations in assay buffer (50 mM Tris, pH 7.5, 15 mM MgCl2. 0.1 mM EDTA and 1 mM DTT) and dispensed 15 μL per well in polypropylene assay plates. Background levels are determined in wells containing Mek and DMSO without Raf. To the Raf/Mek containing wells is added 3 μL of 10 × of RAF265 diluted in 100% DMSO. The raf kinase activity reaction is started by the addition of 12 μL per well of 2.5 × 33P-ATP diluted in assay buffer. After 45-60 minutes, the reactions are stopped with the addition of 70 μL of stop reagent (30 mM EDTA). Filtration plates are pre-wetted for 5 min with 70% ethanol, and then rinsed by filtration with wash buffer. Samples (90 μL) from the reaction wells are then transferred to the filtration plates. The filtration plates are washed 6 × with wash buffer using Millipore filtration apparatus. The plates are dried and 100 μL per well of scintillation fluid is added. The CPM is then determined using a Wallac Microbeta 1450 reader.
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In Vitro Raf Screen
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The activity of various isoforms of Raf serine/threonine kinases can be measured by providing ATP, MEK substrate, and assaying the transfer of phosphate moiety to the MEK residue. Recombinant isoforms of Raf are obtained by purification from sf9 insect ce
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Ensayo celular: [2]
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Cell lines
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Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines
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Concentrations
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0.1 - 10 μM
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Incubation Time
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48 hours
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Method
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The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, RAF265 is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
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Estudio con animales: [2]
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Animal Models
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A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.
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Formulation
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Dissolved in polyethylene glycol-400 (PEG-400) to a concentration of 25 mg/mL. [5]
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Dosages
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12 mg/kg
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Administration
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Orally administered daily
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Solubility
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30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol,
30 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Conversión de diferentes modelos de animales basados en BSA (valor basado en datos del Borrador de Directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Información química
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Molecular Weight (MW)
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518.41
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Formula
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C24H16F6N6O
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CAS No.
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927880-90-8
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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100 mg/mL
(192.89 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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33 mg/mL
(63.65 mM)
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In vivo
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30% PEG400/0.5% Tween80/5% propylene glycol
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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1-methyl-5-(2-(5-(trifluoromethyl)-1H-imidazol-2-yl)pyridin-4-yloxy)-N-(4-(trifluoromethyl)phenyl)-1H-benzo[d]imidazol-2-amine
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Calculadora de molaridad Calculadora de dilución Calculadora de peso molecular
Grupos de Producto : MAPK > Inhibidor de Raf
