.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 213.24 PHA-767491 es un potente inhibidor dual Cdc7 / CDK9 competitivo con ATP con IC50 de 10 nM y 34 nM, respectivamente. Muestra una selectividad de ~ 20 veces contra CDK1 / 2 y GSK3-β, 50 veces más selectividad contra MK2 y CDK5, 100 veces más selectiva contra PLK1 y CHK2. \ N Actividad biológica PHA-767491 muestra aproximadamente 20 veces más selectividad para Cdk1, Cdk2 y GSK3-β, 50 veces selectividad para MK2 y Cdk5 y selectividad de 100 veces para PLK1 y CHK2. PHA-767491 inhibe la proliferación celular en una variedad de líneas celulares humanas con IC50 de 0.86 μM para SF-268 a 5.87 μM para K562, e induce significativamente la apoptosis de una manera independiente de p53 en casi todas las líneas celulares en contraste con 5-FU o gemcitabina que solo funciona en algunas líneas celulares. A diferencia de los inhibidores actuales de la síntesis de ADN, el tratamiento con PHA-767491 a 5 μM bloquea el inicio de la replicación del ADN pero no la progresión de la horquilla de replicación, debido a la inhibición específica de la cinasa Cdc7 y la fosforilación de Mcm2 en el sitio Ser40 dependiente de Cdc7. Los niveles de Mcl-1 regulados al alza en las células OCI-LY1 y SU-DHL-4 resistentes a ABT-737 pueden reducirse significativamente mediante el tratamiento con PHA-767491 a 3 μM posiblemente debido a la inhibición de Cdk9, lo que lleva a la restauración de la Sensibilidad a ABT-737. El efecto de proapoptosis dependiente de mitocondrias directo de PHA-767491 también se observa cuando se aplica a 1 μM en células de leucemia linfocítica crónica (LLC) inactiva a través de un mecanismo similar con EC50 de 0.34-0.97 μM. Mientras que en células de CLL en proliferación estimuladas por CD154 e interleucina-4, el tratamiento con PHA-767491 a 5 μM suprime la síntesis de ADN al inhibir Cdc7 en lugar de desencadenar la muerte celular. La administración de PHA-767491 dos veces al día durante 5 días inhibe significativamente el crecimiento del xenoinjerto HL60 de una manera dosis-dependiente con TGI del 50% y 92% a dosis de 20 mg / kg y 30 mg / kg, respectivamente, el efecto de que también está marcado en los modelos de xenoinjerto A2780, Mx-1 y HCT-116, así como en los carcinomas mamarios inducidos por DMBA, y se correlaciona con la inhibición de Cdc7 y, posteriormente, la fosforilación disminuida de Mcm2 en el sitio dependiente de Cdc7 Protocolo Ser40 (solo como referencia ) Ensayo de quinasa: [1]
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In vitro kinase assays
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The inhibition of Cdc7 and Cdk9 by PHA-767491 (IC50) is determined using the strong anion exchanger (Dowex 1-X8 resin, formate form)-based assay. For each enzyme, the absolute Km values for ATP and the specific substrate are initially determined, and each assay is then run at optimized ATP/33P-γ-ATP mix (2Km) and substrate (5Km) concentrations. Cdc7 kinase assay is performed in a buffer containing 50 mM Hepes pH 7.9, 15 mM MgCl2, 2 mM β- glycerylphosphate, 0.2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km Mcm2 (aa 10-294), 37 nM of recombinant Cdc7/Dbf4 and increasing concentration of PHA-767491 in a final volume of 30 μL, and incubated for 1 hour at 25 °C. Cdk9 kinase assay is performed using 50 nM of recombinant Cdk9/cyclin T in 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 μM Na3VO4, 2Km ATP/33P-γ-ATP mix, 5Km RNA polymerase CDT peptide and increasing concentration of PHA-767491 in a final volume of 30 μL, and incubated for 1 hour at 25 °C. After incubation, an amount of 150 μL of resin/formate (pH 3.0) is added to stop the reaction and capture unreacted 33P-γ-ATP, separating it from the phosphorylated substrate in solution. After 1 hour of rest, a volume of 50 μL supernatant is transferred to Optiplate 96-well plates. After the additon of 150 μL of Microscint 40, the radioactivity is counted in the TopCount.
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Ensayo celular: [1]
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Cell lines
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HeLa, MCF7, HCT-116, U2OS, A2780, K562, SF-539, SF-268, Ovcar8, SW480, COLO205, HCT-15, Jurkat, PC3, and NHDF
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Concentrations
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Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 20 μM
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Incubation Time
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24 or 72 hours
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Method
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Cells are exposed to PHA-767491 for 24 or 72 hours. Cells are lysed and the ATP content in the well, used as a measure of viable cells, is determined using a thermostable firefly luciferase–based assay. Activation of caspase-3 and caspase-7 is measured as a ratio between treated sample and untreated control with a luciferase-based assay, containing a specific proluminescent substrate. DNA replication is measured as incorporation of nucleotide analog BrdU into DNA by flow cytometry.
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Estudio con animales: [1]
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Animal Models
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Female SCID mice subcutaneously implanted with HL60 cells, male Hsd, athymic nu-nu mice subcutaneously implanted with HCT116 cells, A2780 or Mx-1 cells, and female Sprague-Dawley rats with DMBA-induced mammary carcinomas
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Formulation
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Dissolved in DMSO, and diluted in saline
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Dosages
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~50 mg/kg
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Administration
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Intravenous or oral administration twice a day
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Solubility
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80,
30 mg/mL
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* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Conversión de diferentes modelos de animales basados en BSA (valor basado en datos del Borrador de Directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Información química
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Molecular Weight (MW)
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213.24
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Formula
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C12H11N3O
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CAS No.
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845714-00-3
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Storage
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3 years -20℃Powder
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6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
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Synonyms
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CAY10572
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Solubility (25°C) *
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In vitro
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DMSO
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24 mg/mL
(112.54 mM)
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Water
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<1 mg/mL
(
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Ethanol
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<1 mg/mL
(
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In vivo
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1% DMSO/30% polyethylene glycol/1% Tween 80
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30 mg/mL
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* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble.
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.
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Chemical Name
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2-(pyridin-4-yl)-6,7-dihydro-1H-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4(5H)-one
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Calculadora de molaridad Calculadora de dilución Calculadora de peso molecular
Grupos de Producto : Ciclo celular > Inhibidor de CDK
