SGI-1027 1020149-73-8

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 461.52 SGI-1027 es un inhibidor de DNMT con IC50 de 6, 8, 7.5 μM para DNMT1, DNMT3A y DNMT3B, respectivamente. \ n \ n Actividad biológica SGI-1027 inhibe la metilación del ADN al inhibir directamente las DNMT y da como resultado la degradación selectiva de DNMT1 en una amplia variedad de líneas celulares de cáncer humano. SGI-1027 presenta un efecto citotóxico mínimo o nulo en células de hepatoma H4IIE de rata. SGI-1027 (0-100 μM) exhibe un efecto proapoptótico moderado en la línea celular de leucemia humana U937 sin cambios relevantes en el ciclo celular. \ n Ensayo de ADN metiltransferasa (CpG metiltransferasa) La actividad de ADN metilasa se analiza midiendo la incorporación del grupo 3H1-metilo de Ado-Met en el ADN utilizando un ensayo de unión con filtro de intercambio iónico DE-81 con algunas modificaciones. Se incuba DNMT1 humano recombinante, Dnmt3a / Dnmt3b de ratón recombinante (500 ng) con 500 ng de poli (dI-dC) o ADN dúplex hemimetilado y 75 o 150 nM (0,275 μCi o 0,55 μCi) de [metil-3H] -Sadenosilmetionina ( Ado-Met) en un volumen total de 50 μl a 37 ° C durante 1 hora. o M. Sss I se analiza en el tampón del proveedor. Se agrega SGI-1027 o decitabina a las concentraciones indicadas. Cada reacción se realiza por duplicado e incluye controles sin inhibidor o sin ADN. La reacción se detiene sumergiendo la mezcla de reacción en un disco de filtro de intercambio iónico Whatman DE-81, se lava (cinco veces, 10 min cada una, con tampón de fosfato de sodio 0,5 M; pH 7,0), se seca y se cuenta en un contador de centelleo. La radiactividad de fondo (sin control de ADN) se resta de los valores obtenidos con las mezclas de reacción que contienen ADN y la radiactividad obtenida en la reacción sin ningún inhibidor se considera una actividad del 100%. La CI50 se determina por interpolación del gráfico del porcentaje de actividad frente a la concentración de inhibidor. Para determinar la naturaleza de la inhibición de la actividad de DNMTasa por SGI-1027, la actividad de la enzima DNMT1 se mide en presencia de una concentración fija de inhibidor (0, 2,5, 5 y 10 μM) mientras se variaba uno de los dos (Ado-Met o ADN). en una mezcla de reacción particular. A una concentración fija de ADN (500 ng), las concentraciones variables de Ado-Met utilizadas son de 25 a 500 nM, respectivamente. De manera similar, las concentraciones finales de ADN varían de (25-500 ng) a Ado-Met 75 nM. \ n Método Se utilizan células de hepatoma H4IIE de rata como sistema de prueba. Estas células se cultivan en DMEM complementado con suero bovino fetal (10%) y suero de ternera (10%). Las células se siembran en placas de 96 pocillos y después de 48 h se exponen a SGI-1027 en concentraciones que varían de 0 a 300 µmol / L. La solubilidad se determina mediante técnicas de nefalometría inmediatamente después de la dosificación y antes de recolectar las células a las 24 h. Después del período de exposición, las células o su sobrenadante (medio de cultivo) se analizan para detectar cambios en la proliferación celular (yoduro de propidio), fuga de membrana (α-GST), función mitocondrial [3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) Bromuro de -2,5-difeniltetrazolio y ATP celular], estrés oxidativo (GSH intracelular y 8-isoprostano) y apoptosis. La concentración tóxica semimáxima (TC50) se determina a partir de las curvas de dosis-respuesta.

Grupos de Producto : Epigenética > Inhibidor de la ADN metiltransferasa