.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: 305.32 VU0357121 es un nuevo modulador alostérico positivo (PAM) de mGlu5 con EC50 de 33 nM, está inactivo o antagoniza muy débilmente con otros subtipos de receptores mGlu. \ n Actividad biológica VU0357121 hacer no se unen al sitio alostérico MPEP de mGlu5, por lo que no poseen actividad mGlu5 NAM. La mutación A809V / rmGlu5 inhibió la capacidad de VU0357121 para cambiar la curva de concentración-respuesta de glutamato, mientras que la respuesta a VU0357121 no se altera por la mutación F585I / rmGlu5. VU0357121 muestra una cooperación más débil en el ensayo de movilización de Ca2 + en la línea celular HEK293A-mGlu5 de baja expresión. \ n Protocolo (solo como referencia) Ensayo de quinasa: [1]
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Radioligand Binding Assay
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The allosteric antagonist MPEP analogue [3H]methoxyPEPy is used to evaluate the ability of test compounds to interact with the MPEP site on mGlu5. Membranes are prepared from rat mGlu5 HEK293 cells. VU0357121 is diluted in assay buffer (50 mM Tris/0.9% NaCl, pH 7.4) to a 5× stock, and 100 μL of the test compound is added to each well of a 96 deep-well assay plate. Three hundred microliter aliquots of membranes diluted in assay buffer (20 μg/well) are added to each well. One hundred microliters of [3H]methoxyPEPy (2 nM final concentration) is added, and the reaction is incubated at room temperature for 1 h with shaking. After the incubation period, the membrane-bound ligand is separated from free ligand by filtration through glass-fiber 96-well filter plates. The contents of each well are transferred simultaneously to the filter plate and washed 3−4 times with assay buffer using a cell harvester. Forty microliters of scintillation fluid is added to each well and the membrane-bound radioactivity determine by scintillation counting. Nonspecific binding is estimated using 5 μM MPEP. Concentration−response curves are generated using a four parameter logistical equation in GraphPad Prism.
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\ n Conversión de diferentes modelos de animales según BSA (valor basado en datos del borrador de directrices de la FDA)
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Species
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Baboon
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Dog
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Monkey
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Rabbit
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Guinea pig
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Rat
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Hamster
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Mouse
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Weight (kg)
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12
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10
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3
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1.8
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0.4
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0.15
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0.08
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0.02
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Body Surface Area (m2)
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0.6
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0.5
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0.24
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0.15
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0.05
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0.025
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0.02
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0.007
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Km factor
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20
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20
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12
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12
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8
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6
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5
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3
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Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by
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Animal B Km
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Animal A Km
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Por ejemplo, para modificar la dosis de resveratrol utilizada para un ratón (22,4 mg / kg) a una dosis basada en el BSA para una rata, multiplique 22,4 mg / kg por el factor Km para un ratón y luego divida por el factor Km para una rata. Este cálculo da como resultado una dosis equivalente para ratas de resveratrol de 11,2 mg / kg.
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Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×
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mouse Km(3)
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= 11.2 mg/kg
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rat Km(6)
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Grupos de Producto : Señalización neuronal > Inhibidor de GluR
