Daclatasvir (BMS-790052) 1009119-64-5

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 738.88 Daclatasvir (BMS-790052) es un inhibidor altamente selectivo de HCV NS5A con EC50 de 9-50 pM, para una amplia gama de genotipos de replicones de HCV y JFH- 1 virus infeccioso de genotipo 2a en cultivo celular. Fase 3. \ n \ n Actividad biológica BMS-790052 es uno de los inhibidores más potentes de la replicación del VHC reportados hasta ahora. Los valores medios de CE50 de BMS-790052 son 50 y 9 pM para los replicones del genotipo 1a y 1b del VHC, respectivamente. BMS-790052 muestra un índice terapéutico (CC50 / EC50) de al menos 105 y está inactivo frente a un panel de 10 virus de ARN y ADN, con una CE50 superior a 10 μM. Esto confirma la especificidad de BMS-790052 para el VHC. En las células Huh7 que albergan los replicones del genotipo 1b del VHC, BMS-790052 bloquea la replicación del genoma del VHC tanto transitoria como estable, con valores de CE50 que oscilan entre 1 y 15 pM. Se ha demostrado que BMS-790052 (100 pM o 1 nM) altera la localización subcelular y el fraccionamiento bioquímico de NS5A. BMS-790052 inhibe replicones híbridos que contienen genes NS5A del genotipo 4 del VHC con CE50 de 7-13 pM. El residuo 30 de NS5A es un sitio importante para la resistencia mediada por BMS-790052 en los replicones híbridos. \ n Ensayo FRET para inhibidores de NS5A del VHC El péptido (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS] -Glu-Glu-Abu- [COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL] -NH2) contiene un donante de fluorescencia {EDANS, 5 - ácido [(2-aminoetil) amino] naftalen-1-sulfónico} cerca de un extremo del péptido y un aceptor {DABCYL, ácido 4 - [(4-dimetilamino) fenil] azo) benzoico} cerca del otro extremo. La transferencia de energía de resonancia intermolecular entre el donante y el aceptor apaga la fluorescencia del péptido, pero a medida que la proteasa NS3 escinde el péptido, los productos se liberan de la extinción de la transferencia de energía de resonancia. La fluorescencia del donante aumenta con el tiempo a medida que la proteasa NS3 escinde más sustrato. El reactivo de ensayo es: 5 x reactivo de lisis de cultivo celular de luciferasa diluido a 1 x con dH2O, NaCl (150 mM), el péptido FRET (20 µM). Las células HCV-Huh-7 se colocan en una placa de 96 pocillos y se dejan adherir durante la noche (1 x 104 células por pocillo). Al día siguiente, se agrega BMS-790052 a los pocillos y la placa se incuba durante 72 horas. A continuación, la placa se enjuaga con PBS y se usa para el ensayo FRET mediante la adición de 30 µl del reactivo de ensayo del péptido FRET (descrito anteriormente) por pocillo. Las señales se obtienen utilizando el instrumento Cytofluor 4000, que se ha configurado en el modo automático de 340 nm (excitación) / 490 nm (emisión), durante 20 ciclos o menos, con la lectura de la placa en el modo cinético. Después de FRET, se añaden 40 µl de sustrato de luciferasa a cada pocillo y se mide la luciferasa. \ n Método BMS-790052 se añade a placas de 96 pocillos que contienen células replicón de VHC sembradas aproximadamente 12 horas antes en 200 µL de medio. Las placas de células se prueban para actividad de replicación y citotoxicidad después de 72 horas de incubación. La citotoxicidad se mide con CellTiter-Blue, después de lo cual se eliminan el medio y el tinte, las placas se invierten y el líquido restante se seca con toallas de papel. La actividad de replicación de las líneas celulares del genotipo 1a del VHC se cuantifica usando luciferasa de Renilla. Se añade 1 x tampón de lisis de luciferasa de Renilla (30 µl) a cada pocillo y las placas se incuban con agitación suave durante 15 min. A continuación, se añade el sustrato de luciferasa de Renilla (40 µl) y se detectan las señales usando un conjunto de luminómetro Top Count para la cuantificación de la emisión de luz. Se calcula una actividad del cien por cien para cada línea celular para los pocillos de solo DMSO; El porcentaje de actividad se calcula para cada concentración del inhibidor dividiendo el valor medio de los pocillos que contienen el compuesto por el valor medio de los pocillos que contienen DMSO.

Grupos de Producto : Proteasas > Inhibidor de la proteasa del VHC