UPF 1069 1048371-03-4

.cp_wz tabla {borde superior: 1px sólido #ccc; borde izquierdo: 1px sólido #ccc; } .cp_wz table td {borde derecho: 1px sólido #ccc; borde inferior: 1px sólido #ccc; padding: 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right: 1px solid #ccc; border-bottom: 1px solid #ccc; relleno: 5px 0px 0px 5px;} \ n Peso molecular: \ n 279.29 UPF 1069 es un inhibidor selectivo de PARP2 con IC50 de 0.3 μM. Es ~ 27 veces selectivo contra PARP1. \ N Actividad biológica UPF 1069 es un inhibidor selectivo de PARP2 con IC50 de 0,3 μM mientras que inhibe PARP1 con IC50 de 8 μM. En cortes organotípicos de hipocampo, la inhibición de PARP-2 con UPF-1069 (0.01-1 mM) causa una exacerbación dependiente de la concentración (hasta 155%) de la muerte de células piramidales CA1 inducida por privación de oxígeno-glucosa (OGD). Las concentraciones más altas, que actúan sobre PARP-1 y PARP-2, no tienen ningún efecto sobre la lesión de OGD. En células corticales mixtas de ratón expuestas a OGD, UPF-1069 (1-10 mM) reduce significativamente el daño posisquémico. \ n Ensayos de actividad de PARP-1 y PARP-2 La actividad de PARP se evalúa utilizando PARP-1 bovino recombinante y PARP-2 de ratón disponibles comercialmente. Brevemente, la reacción enzimática se lleva a cabo en 100 mL de Tris-HCl 50 mM (pH 8.0) que contiene MgCl2 5 mM, ditiotreitol 2 mM, 10 mg de ADN de timo de ternera sonicado, 0.2 mCi [adenina-2,8-3H] NAD y recombinante enzima PARP-1 o PARP-2 (0,03 U por muestra). Se agregan diferentes concentraciones de los supuestos inhibidores y la mezcla se incuba durante 1 ha 37ºC. La reacción se termina añadiendo 1 ml de ácido tricloroacético al 10% (p / v) y se centrifuga. A continuación, los sedimentos se lavan dos veces con 1 ml de H2O y se resuspenden en 1 ml de NaOH 0,1 M. La radiactividad incorporada de [adenina-2,8-3H] NAD en proteínas se evalúa mediante espectrometría de centelleo líquido. Los extractos nucleares para el ensayo de actividad de PARP se preparan a partir de fibroblastos de ratón PARP-1 - / - y PARP-1 + / + como se describió previamente. Brevemente, se cultivan fibroblastos inmortalizados de ratones PARP-1 - / - y PARP-1 + / + en DMEM suplementado con glutamina 2 mM, suero bovino al 10% y antibióticos a 37ºC. Los extractos nucleares se preparan como sigue: se raspan placas confluentes de 10 cm en 1 ml de tampón de homogeneización compuesto de sacarosa 75 mM, manitol 225 mM y Tris 5 mM, pH 7,4 más 10 ml de cóctel inhibidor de proteasa. La suspensión celular se homogeneiza con un mortero de teflón y la mezcla se centrifuga a 600 xg durante 5 min a 4. El sedimento nuclear crudo se lava y se resuspende en 1 ml de tampón de ensayo PARP (MgCl2 5 mM, DTT 2 mM, Tris 50 mM, pH 8) que contiene N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) 100 mM para activar completamente la actividad PARP. Las muestras que contienen 100 ml del sedimento nuclear resuspendido se incuban durante 60 min a 37ºC en presencia de 3H-NAD 35,5 nM. La reacción se detiene con 1 ml de ácido tricloroacético al 10% (p / v) y la mezcla se centrifuga a 12 000 xg durante 10 min a 4 l. La reacción se termina mediante la adición de 1 ml de ácido tricloroacético al 10% (p / v) y se mide la radiactividad de la suspensión mediante espectrometría de centelleo líquido.

Grupos de Producto : Epigenética > Inhibidor de PARP